[发明专利]一种提高孢子量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵工程领域，尤其涉及在微生物培养过程中的一种提高孢子量的方法。

背景技术

在发酵工程中，米曲霉作为最为重要的工业微生物菌种之一，被广泛用于食品发酵、酶工程等领域，菌种质量是微生物工业中的核心技术。优良的工业菌种，除了具有优良的代谢能力以外，还必须易于扩大培养。因此，在米曲霉菌株的工业化应用中，孢子的形成情况对产品质量起着非常重要的作用，是米曲霉扩大培养的关键性指标。扩大培养的直接目的就是为了获得大量的优良孢子。

如果筛选获得了具有优良性状的菌株，但因产孢量低而满足不了工业化生产使用需求，该菌株也是难以被产业化应用的。因此，提高米曲霉的孢子量一直以来是米曲霉菌种研究中的重要工作，方法主要包括菌种选育和条件控制两个方面。

菌种选育主要指通过诱变、融合等技术手段、结合大量的筛选工作，获得目标菌株。菌种选育的首要目标一般是代谢能力，未有专门通过菌种选育来定向提高产孢量的专利报道。发明人曾在“双亲灭活电融合技术选育酱油生产菌株”一文中通过电融合技术使得曲霉菌种的产孢能力有了比较大的提升。但是，产孢能力与综合酶系等性能之间并无直接关联，选育获得的高产孢子量菌株多数不具有综合酶系性能优良的特征，一些综合酶系性能优良的菌株，也由于产孢量的不足而难以被产业化应用。因此，该方法的优点是提高幅度大、缺点是工作量大且会存在负突变，难以获得高产孢量且综合酶系性能优良的菌种。因而该方法不能直接用于解决低产孢量菌株的工业化应用问题。

条件控制是提高孢子量的重要手段。目前工作中，采用的方法主要包括营养条件(调整碳氮比、微量元素、草木灰等)和环境条件(光照、温度、湿度、磁场等)。如在“磁场对白僵菌菌丝生长和产孢量的影响”一文中利用磁场处理提高了白僵菌产孢量；在“响应面法优化米曲霉产孢工艺条件”一文中通过工艺优化提高了米曲霉的产孢量；在“一种链格孢菌培养基及其制备方法”专利中通过培养基营养成分的优化提高了链格孢菌的产孢量。以上方法的优点是容易实现、缺点是由于产孢量主要是由菌株本身的基因决定的，因而提升幅度有限，故同样难以解决低产孢量菌株的工业化应用问题。

日本研究人员从米曲霉中分离获得了产孢促进剂物质，表明通过化学合成获得了产孢促进剂的结构类似物，同样具有促进产孢的作用。但是，不论是分离纯化还是人工合成，该物质的应用成本均很高，且难以实现工业应用，因而未有该物质的应用技术报道。

综上，如何提供一种能够提升孢子产量、工作量不大又不致形成负突变，且成本相对较小的孢子量提高方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明实施例提供了一种提高孢子量的方法，能够解决低产孢量菌株工业化应用中扩大培养的问题，并且成本低廉。

一种提高孢子量的方法，包括步骤：

1)获取带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物；

2)对所述获取的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物进行灭活处理；

3)将经步骤2)灭活处理后的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物添加至低产孢量菌株的培养基中。

本发明中高产孢量菌株是相对于低产孢量菌株而言，即相对于低产孢量、产孢量少的菌株，能够产生较多孢量的菌株。

优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物含有孢子、菌丝体或培养基物质中的一种或多种。

优选地，所述步骤2)中的灭活处理为利用温度、水分、氧气、射线、压强、化学试剂灭活处理方式中的一种或多种。

优选地，所述利用温度进行灭活处理方式中的条件具体为：温度60℃～150℃，灭活时间5s～24h。

优选地，所述利用压强、温度进行灭活处理方式中的条件具体为：压强0.11MPa，温度121℃，灭活时间30min。

优选地，所述步骤3)中的添加具体为：添加的时间为低产孢量菌株培养阶段的0h～72h，添加量为培养基成分重量的0.01％～100％。

优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物为带有孢子的培养物。

优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物为取走孢子后的培养物废料。

优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物为孢子。

优选地，所述步骤1)中带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物的培养时间为1h～150h。

本发明中所采用的产孢促进剂，一般为杂环类有机化合物。

从以上技术方案可以看出，本发明实施例具有以下优点：