[发明专利]一株植物乳杆菌的筛选及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株植物乳杆菌及其应用。

背景技术

食品安全问题是世界范围内的重要课题，在我国这样的发展中国家问题尤为突出，近年来食源性疾病患者的数目一直居高不下，由微生物引起的食物中毒情况非常严重。添加化学防腐剂是人类使用的重要食品保藏方法，但经长期研究发现过量食用合成的防腐剂对血压，心脏，肾脏等有不良影响，甚至有些化学防腐剂有致癌性，致畸性和易引起食物中毒等问题。热杀菌也是食品加过程中杀灭微生物的重要方法，但对某些低温制品，加热温度过高，其色泽，风味会发生明显变化，营养价值也大幅降低。其它物理方法：如紫外消毒，过滤除菌，钴60照射法等，对人体无毒害作用，但当包装打开后，又有再次感染腐败菌的可能。因此，开发出高效，稳定，安全的天然食品防腐剂市食品工业发展的必然趋势。

单核细胞增生李斯特菌是致病微生物，是人类和动物的严重疾病根源，尤其易于通过污染食品进行传播，更具体的说是通过肉类，肉质品，海产品，奶类及由其衍生的产品。单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。

乳酸菌细菌素（bacteriocins of LAB）是指乳酸菌在代谢过程中通过核糖体合成的一类具有抗菌活性的多肽或蛋白类物质。它们通常可以抑制一些常见的腐败菌和致病菌，如金黄色葡萄球菌，藤黄微球菌，枯草芽孢杆菌，单核细胞增生李斯特菌等。而且大部分乳酸菌细菌素稳定性较好，可与食品一起加热使用，而且易于被人体中的蛋白酶降解，不会在体内积聚引起不良反应，被认为是具有广阔前景的天然食品防腐剂和饲料添加剂。

发明内容

本发明的目的是提供一株产细菌素的植物乳杆菌及其应用，该菌株生产的细菌素可以抑制多种与其近缘的G⁺菌株，并对单核细胞增多性李斯特菌有强烈的抑制性。

本发明提供的植物乳杆菌为植物乳杆菌（lactobacillus plantarum），其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No 5297。

上述植物乳杆菌是以一些最常见的腐败菌和病原菌为指示菌，筛选出产对单核细胞增多性李斯特菌有强烈抑制性的植物乳杆菌菌株，并且通过诱变手段提高其发酵液中的细菌素活力。已于2011年9月28日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所），保藏登记号为CGMCC No 5297。

本发明提供的应用，即植物乳杆菌CGMCC No 5297在抑制李斯特氏菌，尤其是单核细胞增多性李斯特菌中的应用，以及植物乳杆菌CGMCC No 5297在生产细菌素中的应用，同时还有所产细菌素在食品及饲料防腐中的应用。

上述单核细胞增多性李斯特菌优选为单核细胞增多性李斯特菌CVCC1595。

本发明的植物乳杆菌（lactobacillus plantarun）可以产生对多种近源菌有抑制作用的细菌素，并且对李氏杆菌有强烈的抑制性。该细菌素对蛋白酶敏感，具有很好的热稳定性，在121℃作用30min，仍然保持较高的活性。该细菌素在pH2.0-8.0范围处理30min，回调到pH5.0后，均保持很强的抑制指示菌单核细胞增多性李斯特菌CVCC1595的能力。可以应用为具有广阔前景的天然食品防腐剂及饲料添加剂。

附图说明

 图1是野生菌Yal-1的EMS致死曲线。

     图2是筛选菌株CGMCC No 5297的生长曲线。

     图3是筛选菌株CGMCC No 5297生长过程中的pH变化曲线。

     图4是筛选菌株CGMCC No 5297生长过程中抑菌活性的变化曲线。

     图5是利福平标准效价曲线。

     图6是添加不同浓度植物乳杆菌CGMCC No 5297无菌上清的单核细胞增多性李斯特菌的OD₆₂₀变化曲线。