[发明专利]一种罗汉果种质资源离体保存的方法及保存后恢复生长的方法

权利要求书

1.一种罗汉果种质资源离体保存的方法，包括获得脱毒试管苗的步骤和微型块茎的形成、膨大与离体保存步骤，其特征在于：

所述的微型块茎的形成、膨大与离体保存步骤是将获得的脱毒试管苗继代培养20～40天后，切除叶片和顶芽，所得枝条分切成带1～3个节的茎段；所得茎段转接入种质保存培养基中培养60～90天，即有微型块茎形成，所形成的微型块茎继续在种质保存培养基中膨大和保存；其中：

所述的种质保存培养基配方为：(1/4～1)MS+6-BA0.01～3.0mg/L+NAA0.01～0.1mg/L+琼脂5～10g/L+蔗糖30～90g/L+多效唑0.1～3.0mg/L或矮壮素100～1000mg/L。

2.根据权利要求1所述的罗汉果种质资源离体保存的方法，其特征在于：所述的种质保存培养基配方为：(1/4～1)MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.02～0.05mg/L+琼脂6～8g/L+蔗糖45～75g/L+多效唑0.5～2mg/L或矮壮素300～700mg/L。

3.根据权利要求1所述的罗汉果种质资源离体保存的方法，其特征在于：所述的种质保存培养基配方为：1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+琼脂7g/L+蔗糖60g/L+多效唑1mg/L或矮壮素500mg/L。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的罗汉果种质资源离体保存的方法，其特征在于：所述种质保存培养基的pH值为5.5～7.0。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的罗汉果种质资源离体保存的方法，其特征在于：所述茎段转接入种质保存培养基中培养的条件，以及微型块茎继续在种质保存培养基中膨大和保存的条件均为：温度为20～35℃，光照时间为8～14h/d，光照强度为1500～3000lx。

6.按权利要求1所述的罗汉果种质资源离体保存后恢复生长的方法，其特征在于：取出离体保存后的材料，切取微型块茎转入恢复生长培养基中培养30～40天，获得恢复生长的芽苗；所得芽苗按常规方法进行增殖培养和生根培养，获得完整小植株；其中：

所述的恢复生长培养基配方为：MS+6-BA0.01～2.0mg/L或KT0.01～2.0mg/L+NAA0.01～0.2mg/L或IBA0.01～0.2mg/L+蔗糖20～50g/L+琼脂0或5～10g/L。

7.根据权利要求6所述的罗汉果种质资源离体保存后恢复生长的方法，其特征在于：所述的恢复生长培养基配方为：MS+6-BA0.1～1.0mg/L或KT0.1～1.0mg/L+NAA0.01～0.1mg/L或IBA0.01～0.1mg/L+蔗糖30～40g/L+琼脂0或5～10g/L。

8.根据权利要求6或7所述的罗汉果种质资源离体保存后恢复生长的方法，其特征在于：所述恢复生长培养基的pH值5.5～7.0。

9.根据权利要求6或7所述的罗汉果种质资源离体保存后恢复生长的方法，其特征在于：所述微型块茎在恢复生长培养基中的培养条件为：温度为20～35℃，光照时间为8～14h/d，光照强度为1500～3000lx。

10.一种罗汉果种质资源离体保存及保存后恢复生长的方法，包括离体保存步骤和保存后恢复生长步骤，其中：

所述离体保存步骤包括获得脱毒试管苗的步骤和微型块茎的形成、膨大与离体保存步骤，所述的微型块茎的形成、膨大与离体保存步骤是将获得的脱毒试管苗继代培养20～40天后，切除叶片和顶芽，所得枝条分切成带1～3个节的茎段；所得茎段转接入种质保存培养基中培养60～90天，即有微型块茎形成，所形成的微型块茎继续在种质保存培养基中膨大和保存；其中：所述的种质保存培养基配方为：(1/4～1)MS+6-BA0.01～3.0mg/L+NAA0.01～0.1mg/L+琼脂5～10g/L+蔗糖30～90g/L+多效唑0.1～3.0mg/L或矮壮素100～1000mg/L；

所述保存后恢复生长步骤为：取出离体保存后的材料，切取微型块茎转入恢复生长培养基中培养30～40天，获得恢复生长的芽苗；所得芽苗按常规方法进行增殖培养和生根培养，获得完整小植株；其中：所述的恢复生长培养基配方为：MS+6-BA0.01～2.0mg/L或KT0.01～2.0mg/L+NAA0.01～0.2mg/L或IBA0.01～0.2mg/L+蔗糖20～50g/L+琼脂0或5～10g/L。