[发明专利]一种定量分析微量血干血滤纸片上视黄醇及其前体的方法有效
申请号: | 201510232220.1 | 申请日: | 2015-05-08 |
公开(公告)号: | CN104914176B | 公开(公告)日: | 2018-01-02 |
发明(设计)人: | 李廷玉;苗静琨;邹琳;余加林;杨亭 | 申请(专利权)人: | 重庆医科大学附属儿童医院 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 重庆弘旭专利代理有限责任公司50209 | 代理人: | 文巍 |
地址: | 400014 *** | 国省代码: | 重庆;85 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 定量分析 微量 血干血 滤纸 片上视黄醇 及其 方法 | ||
1.一种检测视黄醇及其前体的方法,包括以下步骤:
(1)从样品中萃取视黄醇和/或其前体,包括以下步骤:
①血片溶解:将载有微量血的干血滤纸片用打孔器打出直径3.2mm圆形滤纸血片,置于1.5ml EP管中,加入100µl含0.1% BHT作为抗氧化剂的去离子水,室温振摇,1000rpm,2min,充分溶解血液;
②蛋白变性:取步骤①所得血斑标本,加入200μl含有0.1% BHT和0.025 mmol/L KOH的甲醇变性沉淀蛋白质,漩涡震荡2min;
③萃取:以300μl三氯甲烷作为萃取剂加入步骤②所得的溶液中,室温振摇2min,离心13200 rpm,8min;
④吸取底层的有机溶剂层180μl,氮气吹干,加入100μl流动相充分溶解,用于HPLC-MS/MS检测;
(2)HPLC分离视黄醇及其前体;
(3)MS/MS定量检测。
2.如权利要求1所述的检测视黄醇及其前体的方法,所述HPLC分离视黄醇及其前体步骤中,采用C8色谱柱,甲醇:CH2CL2=95:5,v/v为流动相,以0.2ml/L等度流速,保持柱温20℃进行液相分离。
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