[发明专利]一种调控和提高脱氧核酶催化活性的方法

权利要求书

1.一种调控和提高核酶催化活性的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：第一步骤：通过对已知核酶AB：AGGGACGGGATGTGGAGGGT的核酸序列进行拆分，拆分为核酸片段A：AGGGACGGGA和核酸片段B：TGTGGAGGGT，选择出高催化活性核酸片段A：AGGGACGGGA，第二步骤：具有不同长度胸腺嘧啶碱基的DNA链分别连接两个高催化活性核酸片段A：AGGGACGGGA，形成一系列新的重组核酶AT_nA：AGGGACGGGAT_nAGGGACGGGA，n＝1-12。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一步骤包括分别测试核酸片段A：AGGGACGGGA和核酸片段B：TGTGGAGG GT对于H₂O₂氧化ABTS反应的催化活性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于还包括如下步骤：测试系列重组核酶的催化活性，通过圆二色谱表征其形成G-四聚体DNA的结构。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于还包括如下步骤：分析设计合成的系列重组核酶的结构及其催化活性的关系，总结出高催化活性核酶的结构特征与设计方法。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，测试催化活性的具体步骤如下：将核酸片段溶解在反应缓冲液中，其终浓度为0.125μM，将上述溶液先于95℃水浴加热6分钟，然后缓慢冷却2小时至室温25℃，将终浓度为0.2μM的氯化血红素hemin加入上述热处理后的溶液中，于室温孵育1小时，形成脱氧核酶-hemin复合物，加入终浓度0.5mM的反应物ABTS²⁺和终浓度1mM的H₂O₂于上述溶液中，记录反应进行4分钟时绿色产物ABTS^·+的紫外吸收光谱，产物在418nm处的最大吸光光度值用来定量分析脱氧核酶的催化活性。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括绘制0-8min的动力学曲线。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述重组核酶AT_nA为AT₁₁A。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述重组核酶为平行结构的G-四聚体DNA-hemin形成的复合物核酶。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述重组核酶为AT₈A-hemin组成的复合物核酶。