[发明专利]一个与黄瓜单性结实主效QTL紧密连锁的分子标记Indel-T-47

说明书

技术领域

本发明公开了黄瓜单性结实主效QTL的分子标记，属于蔬菜分子遗传育种技术领域，可用于黄瓜全雌种质的单性结实能力鉴定及分子标记辅助育种。

背景技术

黄瓜是我国大面积栽培的主要蔬菜之一，具有极高的社会价值和经济效益。单性结实是指子房不经过授粉受精或别的刺激而发育成果实的现象。单性结实能力强的黄瓜品种，具有显著的增产潜力，一般可提高产量20％以上，且单性结实的果实因无籽，瓜瓤少，果肉厚，使得品质得到提高，商品性好。因此，单性结实性是与黄瓜产量和品质密切相关的重要经济性状，是黄瓜品种选育的目标性状之一，在黄瓜育种中极具利用价值。

目前，黄瓜单性结实材料或品种的选育主要依靠田间束花隔离进行表型鉴定，该方法不仅耗时长，需要大量的人力和物力，且单性结实容易受外界条件的影响，表型选择效率不高，选育难度大，育成的黄瓜品种存在单性结实性不稳定，易受栽培环境影响等弊端。近年来，随着分子标记技术的发展，许多研究者利用与目标性状QTL连锁的分子标记对种质进行辅助选择，这一方法不受基因表达和环境因素的影响，可在早代进行选择且操作简单，很大程度上提高了选择的速度和准确性。其中InDel(Insertion/Deletion)分子标记是基于全基因组重测序开发的标记，因其在基因组内分布广、密度大、稳定性和多态率高，检测容易且具有共显性遗传，重复性好、对DNA质量要求较低等优点，可以高效准确地用于遗传图谱构建，利用与目标性状连锁的分子标记进行辅助育种。

基于上述目的，本发明开展了黄瓜单性结实遗传机制和单性结实QTL定位研究。以强单性结实自交系‘EC1’为母本，非单性结实自交系‘8419s-1’为父本，构建了F_2:3群体和F_4:5剩余杂合体群体(RHL，Residual heterozygous line)，利用F_2:3群体对黄瓜单性结实主效QTL位点进行定位，利用F_4:5剩余杂合体群体对该主效QTL进行验证，同时结合双亲重测序结果的分析，开发并筛选与主效QTL位点紧密连锁的InDel标记，以及利用F_3:4群体和7份全雌黄瓜种质材料验证该标记对单性结实的选择效果。该标记可为黄瓜单性结实分子标记辅助选择育种提供新型、高效、实用的分子标记。

发明内容

本发明的目的是提供与黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1紧密连锁的分子标记InDel-T-47，并应用这个标记进行黄瓜单性结实种质材料的鉴定。

本发明通过以下技术方案得以实现：

黄瓜自交系‘EC1’中单性结实主效QTL Parth2.1紧密连锁的分子标记InDel-T-47，其上游引物序列为TCAAACGAAAGGTAAGGAGGAATG，下游引物序列为AGGCCTGAAGAGAGCTTCAAAGTA。

本发明还公开了该引物鉴定黄瓜单性结实材料的方法，即用该标记引物对待鉴定材料经行PCR扩增，扩增出155bp特异条带的材料，都具有较强的单性结实能力。

上述引物用于鉴定黄瓜种质材料单性结实能力的具体方法为：

1.以待鉴定材料的DNA作为模板，用InDel-T-47分子标记引物进行PCR扩增；

2.PCR扩增反应体系组成为：10×buffer(含Mg²⁺)2.0μL，dNTP2.0μL，正、反向引物各1μL，Taq酶(5U·μL^-1)0.25μL、DNA(10ng)1.0μL，ddH₂O，12.75μL，反应总体积为20μL。反应程序为94℃预变性5min，每个循环95℃预变性30s，60℃退火30S，72℃延伸1min 20s，35个循环；72℃延伸5min，10℃保存；

3.PCR产物检测：反应产物在7％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，用硝酸银染色。电泳结果如果能扩增出155bp特异条带的植株为含有Parth2.1的植株。

有益效果：

1.本发明公开的‘EC1’中与单性结实主效QTL Parth2.1位点紧密连锁的分子标记引物(InDel-T-47F/InDel-T-47R)是根据双亲基因组重测序的结果设计而成，用来鉴定植株是否含有Parth2.1，与已有文献中公布的ALFP等标记相比，方法简单、方便、扩增稳定。