[发明专利]冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于疫苗生产制备工艺技术领域，具体涉及一种冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法。

背景技术

狂犬病(Rabies)，是由狂犬病毒所致的自然疫源性或动物源性人畜共患急性传染病，流行性广、病死率极高，对人民生命健康造成严重威胁。狂犬病的典型临床表现为恐水症，故狂犬病又称恐水病。初期对声、光、风等刺激敏感而喉部有发紧感，进入兴奋期可表现为极度恐怖、恐水、怕风、发作性咽肌痉挛、呼吸困难等，最后痉挛发作停止而出现各种瘫痪，可迅速因呼吸和循环衰竭而死亡。狂犬病主要通过患病动物咬伤、抓伤或由粘膜感染引起，在特定的条件下还可通过呼吸道气溶胶传染，受染动物唾液内含狂犬病毒，传染动物主要是犬(超过90％)，其次是猫。

对犬进行严格管理、犬免疫或灭犬是控制人狂犬病的有效方法。目前对狂犬病尚无特殊有效的治疗方法，病死率几乎100％。狂犬病疫苗是一个历史悠久的疫苗，接种狂犬病疫苗后，人体血液中可出现抗狂犬病毒抗体，这些抗体可防止狂犬病毒在细胞间直接传播，减少狂犬病毒的增殖量，同时还能清除游离的狂犬病毒，阻止狂犬病毒的繁殖和扩散，从而达到预防狂犬病的目的。

目前狂犬病疫苗还存在着一些急需解决的问题。国内上市的狂犬病疫苗大多都含有明胶和右旋糖酐，大多数对狂犬病疫苗的接种过敏反应是由疫苗中作为保护剂的明胶所致，保护剂中的明胶成分也是疫苗内毒素的主要来源，可导致接种者产生发热反应，所以从保护剂中去除明胶已经成为业界共识。同时，右旋糖酐本身也是一种强有力的抗原，它存在于食糖中，并且在正常人的肠道里发现了可产生右旋糖酐的细菌。少部分人虽然从未接受过右旋糖酐的治疗，而循环中却存在着多糖的沉淀素，这就是为什么首次用药就能出现变态反应的原因。低分子右旋糖酐(如右旋糖酐40)过敏反应可在用药后半小时、几分钟甚至几秒钟内发生，来势凶猛，抢救难度大，用药量几滴到几毫升即可发生过敏性休克反应，甚至死亡。低分子右旋糖酐过敏反应的发生率为0.03％～4.70％，其过敏致死发生率较青霉素高2～4倍。在因抢救无效死亡的右旋糖酐过敏病例中，因过敏性休克引起的死亡占有相当大的比例。据国家药品不良反应监测中心发布的药品不良反应信息通报第3期中警惕“右旋糖酐40与过敏性休克”显示：右旋糖酐40、低分子右旋糖酐引起的可疑不良反应主要有皮疹、肺水肿、肾功能衰竭、过敏性休克等，其中过敏性休克53例，死亡10例。可见右旋糖酐的危险程度远远大于明胶，甚至接近于青霉素，已经上市的使用右旋糖酐作为保护剂的狂犬病疫苗制品，不良反应率均有一定程度的升高。现有的狂犬病疫苗冻干制品或含有明胶、或采用右旋糖酐替代了明胶，但至少含有上述两种成分中的一种。

近年来国内疫苗界普遍采用的细胞培养模式为“静止培养”和“转瓶培养”，缺点是劳动强度和占地空间大，不利于疫苗产量和质量的提高。目前，出现了只单纯采用生物反应器生产狂犬疫苗的方法，但是这种方法存在以下缺点：有效病毒抗原表达含量低、疫苗接种者副反应发生率高、疫苗产量和质量都达不到标准要求。目前，利用细胞工厂培养特定的细胞，再结合利用生物反应器接种特定的狂犬病毒株进行病毒连续培养和收获制备狂犬病疫苗，还未见报道。

发明内容

为了解决现有只采用生物反应器生产狂犬疫苗存在的有效病毒抗原表达含量低、疫苗接种者副反应发生率高、疫苗产量和质量都达不到标准要求的问题，本发明提供一种冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明提供的一种冻干人用狂犬病疫苗，该疫苗是在Vero细胞上接种aG株狂犬病毒，依次经超滤浓缩、分离纯化、冻干后获得的；该疫苗的装量为0.5ml/剂；冻干时所用疫苗冻干保护剂的各成分及其终浓度为：海藻糖60～90g/l、谷氨酸钠6～14g/l、尿素3～6g/l、L-精氨酸2～3g/l、199培养基10g/l，该疫苗冻干保护剂中不含有明胶、人血白蛋白和右旋糖酐。

本发明的冻干人用狂犬病疫苗中不含有任何抗生素及防腐剂。

本发明还提供了上述的冻干人用狂犬病疫苗的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)毒种采用aG株狂犬病毒，培养基质采用Vero细胞；

(2)将复苏后的Vero细胞采用0.25％胰蛋白酶消化分散均匀，加入199培养液混合均匀后加入到细胞工厂中，置于37℃培养至均匀单层Vero细胞；所述细胞工厂采用美国Nunc或CORNING公司生产的细胞工厂；