[发明专利]一种大鼠血浆中C4NP的浓度检测方法

权利要求书

1.一种大鼠血浆中C4NP的浓度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配置浓度为10μg/mL的C4NP溶液，进行质谱条件优化；

2)C4NP进行色谱条件优化以确定色谱柱、流动相组成及比例的条件；

3)根据C4NP的结构、理化性质的条件选择并优化C4NP样品前处理方法；

4)建立C4NP的UPLC-MS/MS方法并进行方法学验证，验证内容包括方法学专属性、线性、准确度与精密度、提取回收率与基质效应、稳定性、稀释效应。

2.根据权利要求1所述的大鼠血浆中C4NP的浓度检测方法，其特征在于，

C4NP进行质谱条件优化，离子源为ESI源；正离子SRM工作模式；喷雾电压：3500V；毛细管温度：300℃；鞘气：45arb；辅助气：5arb；C4NP的离子对m/z:407→327；丁螺环酮离子对m/z:386→122，用作内标；进行色谱条件优化，色谱柱：Kinetex C18XB，流动相：水-乙腈，流速：0.3mL/min；进样量：10μL；C4NP的样品前处理方法采用简单的蛋白沉淀法；将–80℃冷冻保存的血浆样品90μL解冻，加入100ng/mL内标IS溶液10μL，涡旋混匀，加入400μL甲醇，2000频率振荡10min；12000r/min，4℃离心10min，后吸取上清液400μL，35℃下氮气吹干，用100μL10％乙腈水溶液复溶，2000频率振荡10min；12000r/min，4℃离心10min，取10μL上清液，UPLC-MS/MS进样分析；方法学验证表明：在本实验条件下，C4NP和内标丁螺环酮均有较大的色谱峰，相互之间没有明显的干扰，大鼠空白血浆中杂质不干扰样品峰；该方法专属性较高；标准曲线：Y＝-0.018641+0.0264371X，r＝0.9996，线性关系良好，定量下限为5.703ng/mL，日内和日间精密度均＜15.00％，准确度在85.00-115.00％之间；低、中、高3个QC浓度中C4NP的提取回收率在72.86％～77.86％之间，RSD均在15.00％以内，C4NP血浆样品在4℃、25℃中保存12h后稳定，经3次反复冻融后不受影响。