[发明专利]野木瓜种苗的培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物细胞工程技术领域，具体涉及一种利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法。

背景技术

野木瓜（Stauntonia chinensis DC.）为木通科（Lardizabalaceae）野木瓜属（Stauntonia）木质藤本植物。野生分布于广东、广西、香港、湖南、贵州、云南、安徽、浙江、江西、福建等地。生于海拔500-1300米的山地密林、山腰灌丛或山谷溪边疏林中。其具有掌状复叶5-7片，且叶色浓绿，有光泽，是一种具有很高观赏价值的藤本植物，可作为垂直绿化的良好材料。此外野木瓜花期3-4月，果期6-10月，果长圆形，长7-10厘米，直径3-5厘米，果肉可食用，可作为水果品种开发。此外野木瓜全株可药用，民间记载有舒筋活络、镇痛排脓、解热利尿、通经导湿的作用，可用于治腋部生痈、膀胱炎、风湿骨痛、跌打损伤、水肿脚气等。据研究，其对三叉神经痛、坐骨神经痛也有较好的疗效。因此野木瓜可作为一种具有综合开发价值的植物进行开发，具有很高的开发利用价值。

由于生态环境的破坏和掠夺式的采摘挖掘，野木瓜的资源日趋缩小，严重影响了其有序的开发利用，因此需要对其进行种苗繁殖技术的开发。

利用植物组织培养的方式进行野木瓜种苗的培养快繁是一种较好的规模化获得野木瓜种苗的方法，且该方法未见报道和公开应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种生长周期短、移栽存活率高、成本低、操作简单的野木瓜种苗的培养方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽及胚状体增殖和生根培养及移栽；具体包括以下步骤：

（1）预处理：不同的外植体的类型采用不同的浸泡预处理及冷藏预处理；

（2）无菌外植体获得：不同的外植体的类型采用不同消毒灭菌方式获得无菌外植体用于下一步培养；

（3）愈伤组织诱导培养：无菌外植体接种至液体浅层愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养得到状态良好的愈伤组织；

（4）丛生芽及胚状体增殖培养：将步骤（3）中获得的良好的愈伤组织接种到固液双层丛生芽培养基上进行丛生芽增殖培养；或将愈伤组织接种到固液双层胚状体培养基上进行胚状体增殖培养；

（5）生根培养及移栽：将步骤（4）中获得的丛生芽或胚状体浸泡处理后接种到固体生根培养基上进行生根培养，然后将得到的生根苗炼苗后栽培到基质中进行生长得到野木瓜种苗。

采用上述技术方案，通过大量实验证实，该野木瓜种苗的培养方法能够实现增殖率高，生物产量大，培养周期短；组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（1）中的所述外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条或种子。本发明使用的外植体是叶片或叶柄或幼嫩枝条或种子，可以通过多种外植体实现对野木瓜种苗的培养，既方便外植体的获得，又节省了材料避免了浪费。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（1）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，所述预处理的方法是：将所述外植体离体后立即置于添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理3~5h，后置于2~8℃条件下保湿冷藏5~10 d；当所选外植体为种子或种荚时，所述预处理的方法是：将所述外植体清洗干净后浸泡到0.1~0.5%浓度的高锰酸钾水溶液中浸泡0.5~2h后，喷洒少量0.5~0.2%浓度的多菌灵后于2~8℃保湿冷藏处理30~60d。不同的外植体采用不同的方法进行预处理，所采用的预处理方法更适合各个外植体的后续培养；且该预处理过程有利于后续的培养，缩短培养周期。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（2）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，灭菌处理的方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒20~40s后采用升汞灭菌5~10min，然后无菌水冲洗备用；当所选外植体为种子时，灭菌处理的方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒1~2min后采用升汞灭菌10~20min，然后无菌水冲洗，剥离出胚备用。无菌的处理对后续的培养过程是非常关键的，直接影响后续培养的诱导率、增殖率以及生根率，通过大量实验验证，该灭菌方法对后续的培养最好。