[发明专利]同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种鉴别山羊绒PCR-DHPLC检测引物，其特征在于，包括碱基序列：SEQ ID NO.1～2。

2.一种鉴别绵羊毛PCR-DHPLC检测引物，其特征在于，包括碱基序列：SEQ ID NO.3～4。

3.一种同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的PCR-DHPLC检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1和2所述引物SEQ ID NO.1～4。

4.根据权利要求3所述的同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的PCR-DHPLC检测试剂盒，其特征在于：包括5U/μl的Taq DNA聚合酶和PCR反应液；

其中，所述的PCR反应液由权利要求1和2所述引物SEQ ID NO.1～4各10μM、10mM Tris·Cl、50mM KCl、25mM MgCl₂、dNTP各2.5mM组成。

5.一种纺织品中同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的PCR-DHPLC检测方法，其特征在于：包括利用权利要求3所述的检测试剂盒，对纺织品DNA进行PCR方法检测。

6.根据权利要求5所述的纺织品中同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的PCR-DHPLC检测方法，其特征在于：所述对样品DNA进行PCR方法检测的步骤包括：

①PCR反应体系为50μl，其中：样品DNA 4μl、5U/μl的Taq DNA聚合酶0.4μl、PCR反应液24μl、灭菌超纯水21.6μl；

②PCR反应条件：预变性：94℃，3min；进入循环：94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35次循环；终止延伸：72℃，7min。

7.根据权利要求6所述的纺织品中同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的PCR-DHPLC检测方法，其特征在于：还包括以下操作步骤：

对权利要求6所述方法获得的PCR扩增产物进行DHPLC分析，条件如下：

色谱柱：PS-DVB&C18DNASep色谱柱(4.6mm×50mm，粒度3μm)；

柱温：50℃；

流动相(体积比)：0.0min，48.0％缓冲溶液A，52.0％缓冲溶液B；

0.5min，42.9％缓冲溶液A，57.1％缓冲溶液B；

3.6min，38.8％缓冲溶液A，61.2％缓冲溶液B；

6.8min，36.6％缓冲溶液A，63.4％缓冲溶液B

9.9min，35.2％缓冲溶液A，64.8％缓冲溶液B；

13min，34.3％缓冲溶液A，65.7％缓冲溶液B；

其中，缓冲溶液A为50ml TEAA和250μl乙腈混合，加灭菌超纯水定容至1000ml；缓冲溶液B为50ml TEAA和250ml乙腈混合，加灭菌超纯水定容至1000ml；

流速：0.9mL/min；

检测器：荧光检测器，光源：150W Xenon灯；激发谱带宽：15nm；发射谱带宽：15.3nm；检测灵敏度：在波长350nm积分2s；

上样量：PCR产物5μL。