[发明专利]同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测引物、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及纺织品中同时检测山羊绒和绵羊毛成分的检测试剂盒及其检测方法，尤其涉及利用PCR-DHPLC技术进行山羊绒和绵羊毛检测的检测方法及所使用的试剂。

背景技术

现行的纤维检验方法不像检查其他元素一样可以通过仪器精确检定，即便在国际上，也是采用传统的感官检验方法，测试人员通过视觉、触觉来识别其属性。对羊毛和羊绒纤维的鉴别是公认的技术难度最大的检测项目。大量的纤维检测工作者长期以来一直致力于羊毛与羊绒纤维的鉴别技术的研究。目前，鉴别羊绒、羊毛纤维的通用方法是光学投影显微镜法、扫描电镜法和溶液法等物理方法，都是从纤维的外观形态和微观结构上进行辨别。但随着羊毛剥鳞及拉伸等先进技术的应用，即便是经验丰富的资深检验人员有时也难以准确辨别羊绒和羊毛。采用化学方法通过动物纤维中氨基酸、多肽及脂肪的分析结果差异来鉴别鉴别羊绒、羊毛纤维的研究也有较多的文献报道，但是这些方法也各有特点，也不能完全准确鉴定，因为羊绒、羊毛纤维中氨基酸、多肽及脂肪的含量随加工处理过程、动物生长环境和喂养饲料的变化而不同。。显微镜法的缺点是检验结果受检验人员专业水准影响较大，传统的以经验为主的鉴别方法已不能满足科学监管的需要，对检测机构而言，建立科学、准确的轻纺产品快速鉴别方法已迫在眉睫。

发明内容

为了解决上述实际问题，本发明即旨在利用不同动物纤维的遗传物质DNA存在差异的特性，采用聚合酶链式反应PCR和变性高效液相色谱DHPLC技术，针对纺织品中山羊绒和绵羊毛的建立特异性引物对，以及灵敏便捷的检测方法，并建立应用于该方法的快速检测试剂盒。涉及同时检测山羊绒和绵羊毛两种纤维，应用本发明的试剂盒，两种纤维成分可以经过一次PCR反应、一个PCR体系就检测出来。在一次操作过程中同时检测羊毛和羊绒两种纤维，使得检测时间、检测数量和检测水平上都发生了很大的飞跃。本发明运用变性高效液相色谱(DHPLC)采用离子对反相高效液相色谱的原理，通过使用特殊的耐高温液相色谱分离柱同时采用温度调控的方式，对核苷酸片段分子进行分析分离。其快速高通量、全自动化操作、准确度高、重复性好及敏感性高的优点使其在核酸分析中具有无可替代的优势。与传统的显微镜法相比，本发明建立的方法及试剂盒，极大缩短了操作的时间，而且大大降低人为经验因素的影响，使得结果更加准确、可靠。

本发明采用的技术方案为：提取样品DNA，以DNA为模板，同时采用山羊绒和绵羊毛的特异性检测引物进行PCR扩增，再用DHPLC技术采集目的基因的图谱信息，直接从图谱信息读取检测结果，在此基础上，本发明还对此方法进行了特异性和灵敏度检测；其具体操作步骤如下：

本发明的一方面在于：提供一种鉴别山羊绒的检测引物，一种鉴别绵羊毛的检测引物，具体为以下碱基序列：

本发明的一方面在于：提供一种同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测试剂盒，其包括权利上文所述的引物SEQ ID NO.1～4。

对于上述技术方案中所述的同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测试剂盒，包括5U/μl的Taq DNA聚合酶和PCR反应液；分别独立包装；其中，所述的PCR反应液为混合液，包含上文所述的SEQ ID NO.1～4各10μM之外、还包括10mM Tris·Cl、50mM KCl、25mM MgCl2、dNTP各2.5mM。

本发明的另一方面在于：提供一种纺织品中同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测方法，其利用上述技术方案所述的检测试剂盒，对纺织品DNA进行PCR方法检测。

对于上述技术方案中所述的纺织品中同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测方法，其包括以下操作步骤：分别对样品按下述方法进行PCR检测：

①PCR反应体系为50μl，其中：样品DNA 4μl、5U/μl的Taq DNA聚合酶0.4μl、PCR反应液24μl、灭菌超纯水21.6μl。

②PCR反应条件：预变性：94℃，3min；进入循环：94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35次循环；终止延伸：72℃，7min。

对于上述技术方案中所述的纺织品中同时鉴别山羊绒和绵羊毛成分的检测方法，其操作步骤中，还可以包括如下步骤：

对上文所述的山羊绒和绵羊毛成分PCR检测方法获得的PCR扩增产物进行DHPLC分析。