[发明专利]一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法及使用的引物和试剂盒

说明书

本发明公开了一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法，包括：PCR扩增布莱凯特黑牛PID1基因第2外显子的基因序列，选择PID1基因第2外显子第285位碱基为G的布莱凯特黑牛为优质牛种。本发明还公开了筛选所需的引物和试剂盒。本发明首次提出以检测PID1基因突变碱基来筛选优质牛种的方法，为培育优质布莱凯特肉牛品种提供了新的思路。本发明优选使用PCR‑RFLP方法来检测布莱凯特黑牛碱基突变和基因型，通过电泳片段的个数即可筛选出优质牛种，把测序技术筛选SNP和PCR‑RFLP技术结合起来，解决了SSCP的不稳定性和普通RFLP的局限性，简单、快速、成本低、精确度高、检测结果直观、便于推广。

技术领域

本发明涉及一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法，扩增PID1基因第2外显子所使用的引物，以及筛选优质牛种所使用的试剂盒，属于动物分子遗传学技术领域。

背景技术

随着饮食文化的丰富和人们生活水平的不断提高，越来越多的人意识到牛肉特有的营养价值。牛肉含有人体所需的必需氨基酸，具有高蛋白、低胆固醇的特点，营养丰富。随着消费群体的增大，牛肉在肉类消费中的比重在逐年攀升，牛肉价格也连续走高。消费总量在不断增长的同时，人们对牛肉的质量也有了更高的要求，“雪花牛肉”、“高档牛肉”逐渐成为消费时尚，消费者对高档牛肉的需求也越来越迫切。国内现阶段大多数的“高档牛肉”主要依赖进口，这一现实状况对我国高档肉牛品种的选育提出了新的挑战。我国肉牛现有五大品种，八大地方品种，但多为兼用型，肉牛的综合生产水平较低，特别是牛肉的质量较国外有很大的差距，高档肉牛的培育相对滞后，培育高档肉牛已是必然趋势。

布莱凯特黑牛是一种优质肉牛新品种，是通过体细胞克隆等现代生物技术结合常规育种杂交方法，对当地的鲁西黄牛和渤海黑牛进行改良而获得的优良种质资源。该杂交种质充分显现了杂种优势，保留了和牛肉质特性和部分外表特征，获得了鲁西黄牛和渤海黑牛适应本土环境和地理条件的生理特性。由于致密化的脂肪具有一定的硬度，其肉块可切成小方块、中方块和大方块，每个切面都成大理石花纹的独特特性。该牛最大特点是肉质好，呈典型的大理石花纹，又称“雪花肉”，细嫩多汁，其牛肉含有丰富的蛋白质，氨基酸组成比猪肉更接近人体需要，能提高机体抗病能力，CoQ10含量也相对较高，具有营养心肌、增强抵抗力的功能，同时含铁量丰富，饱和脂肪酸含量很低，不饱和脂肪酸含量高，风味独特，肉质鲜美，口感特别，营养丰富，肉用价值极高，是我国肉牛品种中不可多得的优质肉牛新种质，因此快速高效的培育肉质、营养更加优良的肉牛品种是当务之急。

目前，对布莱凯特黑牛优质牛种进行筛选或者培育优质牛种的方法很少有报道，目前常用SSCP和普通RFLP技术进行单核苷酸多态性(Single nucleotide Polymorphisms，SNPs)检测及群体遗传多态性分析，这些方法不稳定，有些突变不引起DNA弯曲，分子构象不改变，在通常的条件下，这些突变可能未被检出，因而，只通过这些技术并不能证明完全没有突变，实际应用中可能会遇到相当比例的假阴性结果；同时目前的检查技术灵敏度不高，受多种因素如电泳温度、离子强度(即电泳缓冲液浓度)、凝胶浓度、甘油的浓度和交联剂亚甲基双丙烯酰胺的浓度等的影响，导致重复性差；加之其操作过程复杂，这极大的限制了其在生产中的应用。

发明内容

针对现有技术中还没有一种快速有效的筛选优质牛种的方法的不足，本发明提供了一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法，该方法能够快速、简洁的筛选出优质的布莱凯特黑牛牛种，准确性高，为培育肉质、营养更加优良的莱凯特黑牛品种提供了技术支持。

本发明还提供了一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的试剂盒，使用该试剂盒可以方便的筛选出优质牛种，便于应用。

本发明还提供了一种扩增布莱凯特黑牛PID1基因第2外显子的引物，该引物能准确的扩增出布莱凯特黑牛PID1基因第2外显子，为优质牛种的筛选提供了良好的基础。