[发明专利]利伐沙班中间体的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及利伐沙班中间体的高效液相色谱检测方法。

背景技术

利伐沙班(Rivaroxaban)，分子式：C₁₉H₁₈ClN₃O₅S，化学名为5-氯-氮-({(5S)-2-氧-3-[4-(3-氧-4-吗啉基)苯基]-1,3-唑烷-5-基}甲基)-2-噻吩-羧酰胺，其化学结构如式A所示；利伐沙班是一种新的口服抗凝药物，目前已批准上市的利伐沙班药品有拜耳医药保健股份公司生产的利伐沙班片(商品名称：拜瑞妥)。

4-[4-[(5S)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮是合成利伐沙班的重要中间体，其化学结构如式B所示；它的对映异构体为4-[4-[(5R)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮，其化学结构如式C所示。

一般情况下，4-[4-[(5S)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮产品中不可避免地会存在有4-[4-[(5R)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮等杂质化合物，检测其中的杂质化合物对于4-[4-[(5S)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮产品以及利伐沙班的质量控制具有重要的意义。

高效液相色谱是一种常用的检测方法，它又分为反相高效液相色谱、正相高效液相色谱，由于两者的固定相、流动相等都完全不同，因此它们是两种差异非常大的检测方法，具体而言：

反相高效液相色谱：采用非极性或相对极性较弱的固定相，以极性较强的溶剂作为流动相，常用于分离、检测非极性和极性较弱的化合物；反相高效液相色谱在现代液相色谱中的应用最为广泛，据统计，它占整个高效液相色谱应用的80％左右。

正相高效液相色谱：采用极性固定相，以相对极性较弱的溶剂作为流动相，常用于分离、检测中等极性和极性较强的化合物。

本领域中，通常采用反相高效液相色谱对式B所示化合物或其盐进行检测，如：中国专利CN 103822997 A就是采用反相高效液相色谱对利伐沙班中间体(式B所示化合物的盐酸盐，如式D所示)进行检测，然而该方法需要以高氯酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，才能实现利伐沙班中间体峰和杂质峰的完全分离，梯度洗脱时间长，操作步骤繁杂，且需要特定的流动相梯度才能达到较高的分离度，在实际应用中存在诸多不便。

目前，未见有式B所示化合物检测方法的相关报道。

因此，亟需研发一种操作简便、分离度高的式B所示化合物的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供利伐沙班中间体的高效液相色谱检测方法。

本发明提供的利伐沙班中间体的高效液相色谱检测方法，它包括以下步骤：

a、制备供试品溶液：取4-[4-[(5S)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮，用流动相溶解，制成浓度为0.05mg/ml～1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；

b、制备对照品溶液：取4-[4-[(5R)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮，用流动相溶解，制成浓度为0.04μg/ml～10μg/ml的溶液，作为对照品溶液；

c、采用正相高效液相色谱分别对供试品溶液、对照品溶液进行检测，检测条件为：

色谱柱的固定相：表面涂敷纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]的硅胶为填料；

流动相：正己烷-乙醇-二乙胺，所述的流动相是由以下体积份数的组分组成：正己烷30份～60份、乙醇70份～40份、二乙胺0.1份～0.5份；

检测波长：230nm～270nm；

d、按外标法以峰面积计算供试品中4-[4-[(5R)-5-(氨甲基)-2-羰基-3-唑烷基]苯基]-3-吗啉酮的含量。

进一步的，步骤a中，供试品溶液的浓度为0.2mg/ml；步骤b中，对照品溶液的浓度为0.04μg/ml～2μg/ml。

进一步的，步骤c中，色谱柱的规格为：内径为4.6mm，长度为250mm，填料粒径为5μm。

进一步的，步骤c中，色谱柱为CHIRALCEL OD-H或CHIRALCEL AD-H。

进一步的，步骤c中，所述的流动相中，正己烷：乙醇：二乙胺的体积比为30：70：0.1～60：40：0.5。