[发明专利]猪圆环病毒2型基因工程亚单位口服疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种乳酸乳球菌MG1363/pMG36e-ORF2，其保藏号为CCTCC NO：M 2015156。

2.如权利要求1所述的乳酸乳球菌，其中一部分基因片段的基因序列为：SEQ ID NO:1：ATG ACT TAT CCA CGT CGT CGT TAT CGT CGT CGT CGT CAC CGT CCA CGT TCA CAT

CTT GGT CAA ATT CTT CGT CGT CGT CCA TGG CTT GTT CAT CCA CGT CAT CGT TAT

CGT TGG CGT CGT AAA AAT GGT ATC TTT AAC GCT CGT CTT TCA CGT ACT TTT GGT

TAT ACT GTT AAA GCT ACT ACT GTT TCA ACT CCA TCA TGG GCT GTT GAT ATG CTT

CGT TTT AAC CTT GAT GAT TTT GTT CCA CCA GGT GGT GGT ACT AAT AAA ATA TCA

ATA CCA TTT GAA TAC TAT CGT ATT CGT AAA GTC AAA GTT GAA TTC TGG CCA TGT

TCA CCA ATT ACT CAA GGT GAT CGT GGT GTT GGT TCA TCA GCT ATT ATC CTT GAT

GAT AAT TTT GAT ATC AAA GCT ACT GCT CAA ACT TAC GAT CCA TAT GTT AAT TAC

TCA TCA CGT CAT ACT ATT CCA CAA CCA TTT TCA TAT CAT TCA CGT TAC TTT ACT

CCA AAA CCA GTT CTT GAT TCA ACT ATT GAT TAC TTT CAA CCA AAC AAT AAA CGT

AAC CAA CTT TGG ATG CGT CTT CAA ACT TCA CGT AAT GTT GAT CAT GTT GGT CTT

GGT ACT GCT TTT GAA AAC TCA AAA TAT GAT CAA GAT TAT AAC ATT CGT GTT ACT

ATG TAT GTT CAA TTT CGT GAA TTC AAC CTT AAA GAT CCA CCA CTT AAA CCA TAA。

3.一种制造如权利要求1所述的乳酸乳球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、将猪圆环病毒2型ORF2基因进行优化改造，并且对ORF2基因序列进行合成，得到pUC18-ORF2质粒；

步骤2、对所述pUC18-ORF2质粒在大肠杆菌中构建pMG36e–ORF2质粒，并进行测序分析；

步骤3、将所述pMG36e–ORF2质粒在乳酸乳球菌MG1363中构建，得到乳酸乳球菌MG1363/pMG36e-ORF2。

4.根据权利要求3所述的制造方法，其特征在于，所述步骤1中，所述优化改造为：将猪圆环病毒2型ORF2基因序列中的稀有密码子替换为偏爱密码子。

5.根据权利要求3所述的制造方法，其特征在于，所述步骤1中，对所述ORF2基因进行合成包括以下步骤：

所述ORF2基因序列两端分别加上相应的酶切位点SalⅠ和酶切位点SacⅠ，合成ORF2基因，连接到pBluescript II SK载体上，按照设定的SalⅠ和SacⅠ进行酶切，克隆至pUC18质粒载体上，转化感受态JM109细胞，选取阳性的所述pUC18-ORF2质粒。

6.根据权利要求5所述的制造方法，其特征在于，所述选取阳性的pUC18-ORF2质粒，包括以下步骤：挑取阳性的所述感受态JM109细胞的单菌落，OMEGA试剂盒小量提取质粒，酶切鉴定阳性所述pUC18-ORF2质粒。