[发明专利]微生物鉴定用质谱仪分子量校正标准品及其制备方法与应用

权利要求书

1.微生物鉴定用质谱仪分子量校正标准品，其特征在于，含有大肠杆菌（Escherichia coli）特征蛋白，该特征蛋白的质荷比m/z分别为：2094，2466，3149，4364，5095，5380，6241，6254，6315，6410，6856，7157，7273，7872，8368，9742，10137，10299，12227；

所述的标准品通过以下方法制备得到：

（1）选择大肠杆菌ATCC8739、MG1655、JM109，将三株菌培养至对数生长期后，收集菌株，按照质量比3-8：1-5:1-3将三者混合；

（2）按照质量体积比5-10 mg:0.1-0.5mL向三株大肠杆菌混合物中加入蛋白洗涤液A，再按照与蛋白洗涤液A的体积比5-2:1加入蛋白洗涤液B；混匀、离心、弃上清；

所述蛋白洗涤液A为去离子水或超纯水；蛋白洗涤液B为无水乙醇；

（3）向步骤（2）获得的沉淀中加入蛋白溶解液A，二者的质量体积比为5-10 mg:0.025-0.125 mL，充分混匀后再加入与蛋白溶解液A相同体积的蛋白溶解液B，离心，取上清即为标准品；

所述蛋白溶解液A为50%-80%的色谱级甲酸，蛋白溶解液B为色谱级乙腈。

2.如权利要求1所述的标准品，其特征在于，步骤（1）中三株菌的质量比为4-7:1-4:1-2；步骤（2）和步骤（3）的离心均为10000-13000 rpm，2-5 min。

3.一种用于微生物鉴定用质谱仪分子量校正试剂盒，其特征在于，含有权利要求1-2任一所述的标准品。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品为冻干品，还含有蛋白溶解液A、蛋白溶解液B和基质溶解液，所述蛋白溶解液A为50%-80%的色谱级甲酸，蛋白溶解液B为100%色谱级乙腈；基质溶解液为49%的乙腈、2.0%的三氟乙酸、49%超纯水。

5.权利要求1-2任一所述的标准品或权利要求3-4任一所述的试剂盒在质谱鉴定微生物中的应用。

6.权利要求1-2任一所述的标准品或权利要求3-4任一所述的试剂盒在MALDI-TOF MS鉴定微生物中的应用。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）取权利要求1-2任一所述的标准品点于质谱样品靶板上，室温干燥后在蛋白标准品上覆盖用基质溶解液制备的α-氢基-4-羟基肉桂酸饱和溶液，室温干燥后进质谱使用，或

取权利要求3-4任一所述试剂盒中标准品1管，按照体积比1：1-2加入蛋白溶解液A，振荡溶解后加入与蛋白溶解液A等体积的蛋白溶解液B，混匀；取标准品液，点于质谱样品靶板上，室温干燥后在蛋白标准品上覆盖用基质溶解液制备的α-氢基-4-羟基肉桂酸饱和溶液，室温干燥后进质谱使用；

所述蛋白溶解液A为50%-80%的色谱级甲酸，蛋白溶解液B为色谱级乙腈；

2）质谱采集的参数设定：线性阳离子采样模式，采集质荷比范围2000-20000Da，对于目前商业化的微生物鉴定用质谱仪，源电压、透镜电压、延迟提取时间、激光频率、采集谱图扫描数目参数的设定以各自的要求及仪器状态为准。