[发明专利]一种利用赤藓糖醇废弃菌泥生产赤藓糖醇的方法

权利要求书

1.一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

（1）将经过常规斜面活化的赤藓糖醇菌种用接种环取1环接种至一级培养基中，在温度为25～30℃、pH为4.5～7.5、转速为100～225r/min的条件下，进行摇床培养24～36h获得一级种子液，再将一级种子液以5～10%的接种量接入二级培养基，在温度25～30℃、pH为4.5～7.5、转速为100～225r/min的条件下，进行摇床培养12～18h获得二级种子液，将二级种子液以5～10%的接种量接入至发酵培养基中，在温度为25～30℃、pH为4.5～7.5、溶氧量为10～80%、转速为100～400r/min的条件下进行发酵120～168h，制得赤藓糖醇糖液和菌泥的混合物；

（2）将步骤（1）所述混合物用离心机分离，制得赤藓糖醇糖液和菌泥，将菌泥加水稀释打匀成10～20%重量体积比的菌泥悬液；

（3）将步骤（2）所述菌泥悬液与1～5%重量体积比的固定化载体混合均匀，转移至固定化器皿中，滴入重量体积比为2-5%的氯化钙固定3～4h，其中菌泥∶固定化载体∶氯化钙的重量比为10～20∶2～5∶1～2，以常规方法制备得到固定化细胞颗粒；

（4）上步骤（3）所述固定化细胞颗粒按10～20%的重量比，加入含有10～50%重量体积比的葡萄糖和0.5～2%重量体积比的氮源的灭菌发酵液中，其中葡萄糖和氮源的重量比为5～100∶1，在温度为25～32℃和pH＝4.5～7.5的条件下进行发酵，以发酵液中葡萄糖的残留小于0.1%的重量体积比则为转化中止的控制指标，得到赤藓糖醇糖液；

（5）将得到的赤藓糖醇糖液采用常规方法脱色和离子交换进行纯化后，经常规方法浓缩，结晶，离心分离后制得赤藓糖醇晶体。

2.根据权利要求1所述一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：所述赤藓糖醇菌种包括解假丝酵母（Candida lipolytica）、丛梗孢酵母（Moniliella pollinis）和类丝孢酵母（Trichosporonoides  megachiliensis）中的一种。

3.根据权利要求1所述一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：步骤（4）所述发酵在发酵减弱后，更新灭菌发酵液进行再次发酵。

4.根据权利要求1一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：步骤（4）所述氮源为酵母粉和／或尿素。

5.根据权利要求1所述一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：步骤（3）所述固定化载体为海藻酸钠、明胶和壳聚糖中的一种。

6.根据权利要求1所述一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：步骤（1）所述一级培养基、二级培养基和发酵培养基的组份均包含：重量体积比为10～30%的蔗糖和/或葡萄糖，重量体积比为1～5%的酵母粉，其中蔗糖和/或葡萄糖和酵母粉的重量比为2～30∶1。

7.根据权利要求6所述一种利用赤藓糖醇生产废弃菌泥制备固定化菌体生产赤藓糖醇的方法，其特征在于：步骤（4)所述葡萄糖的残留量采用常规的高效液相色谱检测分析。