[发明专利]一株戊糖片球菌P9-5及其筛选鉴定和应用

权利要求书

1.一株戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）P9-5，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.10573。

2.一种如权利要求1所述戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）P9-5在抗单核细胞增生李斯特氏菌中的应用。

3.一种如权利要求1所述戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）P9-5的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a：乳酸菌的分离纯化；

步骤b：乳酸菌的筛选；

步骤c：抗单核细胞增生李斯特氏菌菌株的初筛；

步骤d：抗单核细胞增生李斯特氏菌菌株的复筛。

4.一种如权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤a包括：称取样品25g，加入225ml MRS液体培养基，37℃培养48h，混合均匀后分别用微量移液器吸取1ml培养液用生理盐水稀释10^-1-10^-6六个梯度，取10^-4，10^-5，10^-6三个浓度各0.1ml涂布MRS平板，37℃培养24h，挑取单菌落纯化。

5.一种如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤b包括：采用反相高效液相色谱法测定纯化后的菌落发酵液中的乳酸含量；

挑取纯化后的菌落于MRS液体培养基中，37℃培养48h后，取发酵液5mL，8000r/min离心10min，除去菌体，加入5mL 0.01mol/L的硫酸水溶液进行酸解，离心除去硫酸钙，以0.22μm的滤膜过滤，取1mL滤液稀释10倍即得到待测液供上机检测；

将检测到产生乳酸的纯化后菌落进行革兰氏染色镜检和过氧化氢实验，选取革兰氏阳性过氧化氢酶阴性菌为所需乳酸菌并保存。

6.一种如权利要求5所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤c包括：将单核细胞增生李斯特氏菌接种到TSA平板，30℃培养24h；

挑取TSA平板上单增李斯特氏菌菌落于TSB肉汤培养基中37℃培养18小时，取1mL稀释50倍后，取100μL涂布TSB平板；

将筛选出的乳酸菌株，接种于MRS肉汤培养基中37℃培养48h，每个TSB平板上放置4个牛津杯，其中一个牛津杯加入100μl MRS肉汤培养基作为空白，另外三个牛津杯分别加入100μl菌液，置于30℃培养箱中培养48h，观察试验菌株周围是否有抑菌圈。

7.一种如权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤d包括：选出初筛过程中有抑菌活性的乳酸菌株，接入MRS肉汤培养基培养3d后，8000r/min离心10min；

用1mol/L NaOH溶液调整发酵液的pH到6.5-7.0；

单增李斯特氏菌在TSB培养基中37℃培养18小时，按1%接种量接种于10ml TSB液体培养基中，加入乳酸菌发酵液，置于35℃培养，连续培养8h，测定培养液OD值，以不加乳酸菌发酵液的单增李斯特氏菌培养液为对照。