[发明专利]一种需氧菌性及细菌性阴道病联合测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及试剂盒，尤其涉及一种需氧菌性及细菌性阴道病联合测定试剂盒及制备和使用方法。

背景技术

需氧菌阴道炎是近年来新发现的一种阴道炎，约占阴道感染的20％，其主要致病菌是B 族链球菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌和埃希氏大肠杆菌。目前，常用的检测阴道分泌物中需氧菌的方法是微生物培养法，其是将阴道分泌物接种在血平皿上，培养后进行分离，鉴定，该方法复杂、费时，不便于临床常规特别是门诊病人的使用。

发明内容

本发明提供了一种需氧菌性及细菌性阴道病联合测定试剂盒及制备和使用方法。具有可同时检测过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶和凝固酶以诊断需氧菌性及细菌性阴道病的特点。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是：一种需氧菌性及细菌性阴道病联合测定试剂盒，包括显色剂和反应装置，所述反应装置包括氧化氢反应垫、唾液酸苷酶反应垫、白细胞酯酶反应垫、β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫和凝固酶反应垫。

所述过氧化氢反应垫上包被有4-氨基安替吡啉、磷酸盐、3,5二氯二羟基苯磺酸和过氧化物酶。

所述唾液酸苷酶反应垫上包被有甲酚酯、乙酸盐和冰乙酸。

所述白细胞酯酶反应垫上包被有5溴-4氯-3吲哚乙酸盐、磷酸盐。

所述β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫上包被有5溴-4氯-3吲哚基β-D-葡萄糖醛酸钠、磷酸盐和氯化钙。

所述凝固酶反应垫包被有甘氨酰-精氨酰4-甲基-β-萘胺盐酸盐和三羟甲基氨基甲烷（tris-hcl）。

所述显色剂包括显色剂A和显色剂B，所述显色剂A为0.2%氢氧化钠溶液，所述显色剂B为25g/L固蓝Ｂ溶液。稀释液为0.9%的氯化钠溶液。

一种需氧菌性阴道病五项联合检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1）过氧化氢反应垫的制备

分别称取浓度为3.2×105U/L的过氧化物酶20mg、3,5二氯二羟基苯磺0.25g、4-氨基安替吡啉0.3g加入100ml浓度为200mmol/L的磷酸盐缓冲液中，充分搅拌溶解，再调节PH至5.0±0.2，然后用移液枪吸取2ul药液注入空白膜上，最后将滴有溶液的药膜置于烘箱中35℃干燥4小时制得过氧化氢反应垫；

2）唾液酸苷酶反应垫的制备

称取甲酚酯0.35g、加入99ml浓度为260mmol/L的乙酸盐缓冲液中充分搅拌溶解，再加入1ml浓度为4mol/L的冰乙酸将PH降至6.5±0.2，然后用移液枪吸取2ul药液注入空白膜上，最后将滴有溶液的药膜置于温度20℃，湿度在50%下干燥8小时制得唾液酸苷酶反应垫；

3）白细胞酯酶反应垫的制备

称取5溴-4氯-3吲哚乙酸盐0.2g，加入100ml浓度为180mmol/L的磷酸盐缓冲液中，搅拌溶解，再调节PH至5.8±0.2，然后用移液枪吸取2ul药液注入空白膜上，最后将滴有溶液的药膜置于温度20℃，湿度在50%下干燥8小时制得白细胞酯酶反应垫；

4）β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫的制备

分称取5溴-4氯-3吲哚基β-D-葡萄糖醛酸钠0.25g、氯化钠90mg 加入磷酸盐缓冲液中，搅拌溶解，再调节PH至6.3±0.2，然后用移液枪吸取2ul药液注入空白膜上，最后将滴有溶液的药膜置于温度20℃，湿度在50%下干燥8小时制得β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫；

5）凝固酶反应垫的制备

称取甘氨酰-精氨酰4-甲基-β-萘胺盐酸盐0.25g，加入100ml浓度为185mmol/L三羟甲基氨基甲烷(tris-hcl)缓冲液中，搅拌溶解，再调节PH至7.5±0.2，然后用移液枪吸取2ul药液注入空白膜上，最后将滴有溶液的药膜置于温度20℃，湿度在50%下干燥8小时制得凝固酶反应垫；

6）显色剂的制备

显色剂A，称取2g氢氧化钠加入1000ml纯化水中，搅拌溶解制得0.2%氢氧化钠溶液，取1ml装瓶得显色剂A；

显色剂B，称取2.5g固蓝B加入99ml纯化水中，搅拌溶解，再滴加1ml聚氧乙烯月桂醚搅拌均匀制得显色剂B；

稀释液，称取0.9g氯化钠加入100ml纯化水中，搅拌溶解制得稀释液。