[发明专利]一种基于BioLog微平板的原生奶嗜冷菌的快速检测方法

权利要求书

1.一种基于BioLog微平板的原生奶嗜冷菌的快速检测方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）原生奶嗜冷菌的分离纯化；

2）Biolog快速鉴定法的菌悬液的制备；

3）Biolog快速鉴定法的加样和培养；

4）通过Biolog微生物鉴定，自动和数据库对比，确定该原生奶嗜冷菌的种属。

2.如权利要求1所述的一种基于BioLog微平板的原生奶嗜冷菌的快速检测方法，其特征在于所述的步骤1）中原生奶嗜冷菌的分离纯化具体为：用接种环无菌操作从原料乳中取样，在平板培养基上进行划线分离，然后在7℃培养箱中培养7天，挑取平板上生长的白色菌落，再次分离纯化，接种到斜面培养基中，7℃培养箱中培养3d，所述的平板培养基由以下原料构成：酵母提取物2.5g、胰蛋白胨5.0g、葡萄糖1.0g、脱脂奶粉1.0g、琼脂10.0～15.0g、去离子水1000mL，所述的斜面培养基由以下原料构成：酵母提取物2.5g、胰蛋白胨5.0g、葡萄糖1.0g、脱脂奶粉1.0g、琼脂10.0～15.0g、去离子水1000mL。

3.如权利要求1所述的一种基于BioLog微平板的原生奶嗜冷菌的快速检测方法，其特征在于所述的步骤2）中Biolog快速鉴定法的菌悬液的制备具体为：用接种液将棉签稍微浸湿，用棉签沾取步骤1）得到的纯培养菌落，轻轻滚动，将菌落取到接种液中，在试管内壁接种液液面的上方，旋转挤压棉签将菌落团分散，然后上下移动棉签，将分散的菌落和接种液充分混合形成均一，无菌团的菌悬液，调整浊度直至达到允许的范围。

4.如权利要求1所述的一种基于BioLog微平板的原生奶嗜冷菌的快速检测方法，其特征在于所述的步骤3）中加样条件为：把步骤2）得到的菌悬液倒入储液槽，移液器头安放到移液器上，吸取上述稀释液，保证每个移液器头中的液面一致，加入至Biolog ECO微平板中，150μL／孔，加完之后盖上盖子；培养条件为：在7℃恒温培养箱中培养2-3天，准备一个塑料容器，在底部铺上湿纸巾，把鉴定板放在纸巾上，可以防止鉴定板外缘孔水分的蒸发，鉴定板培养4-6个小时可以进行一次读数，过夜培养可再进行一次读数，之后每隔24h读数一次。

5.如权利要求1所述的一种基于BioLog微平板的原生奶嗜冷菌的快速检测方法，其特征在于所述的步骤4）具体包括：开启读数仪和电脑，打开BIOLOG软件，并对读数仪进行初始化，设置好各项参数：培养时间、菌株名称、菌株编号、菌株类型，用纸巾擦干净培养好的鉴定板底部，放入读数仪，A-1孔位于左上方，即可点击“Read This”进行读数，鉴定结果自动显示在屏幕下方，将所得数据进行保存，并在细菌数据库中进行比对鉴定。