[发明专利]牛奶中抗生素残留的检测方法及其应用

权利要求书

1.牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征是，所述抗生素是指磺胺类、喹诺酮类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类共五大类 33种兽药残留，具体包括：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、恶喹酸、氟甲喹、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺氯哒嗪、诺氟沙星、青霉素G、氨苄西林、青霉素V、丹诺沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、马波沙星、阿莫西林、氟罗沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥比沙星、双氟沙星、苯唑青霉素、拉夫西林、邻氯青霉素、四环素、强力霉素、土霉素、双氯青霉素、金霉素、交沙霉素；另有抗生素内标物3种，具体包括¹³C6-磺胺二甲嘧啶、D5-氯霉素、D₅-恶喹酸，所述的检测方法为在线固相萃取—高效液相色谱—质谱联用检测方法；所述高效液相色谱采用C18分析柱，柱温为30℃，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱梯度以体积计95:5洗脱2.5min，以体积计75:25洗脱3.5min，以体积计5:95洗脱4.0min，以体积计95:5洗脱2.5min。

2.根据权利要求1所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征是，所述在线固相萃取采用C18柱或者HLB柱，所述在线固相萃取的淋洗程序包括以下步骤，首先依次通过甲醇-水-缓冲溶液活化，具体程序为，甲醇以5mL/min的淋洗速度淋洗0.2min，水以5mL/min的淋洗速度淋洗0.4min，缓冲溶液以5mL/min的淋洗速度淋洗0.6min，然后将待测牛奶样品上样，具体程序为，水以0.5mL/min的淋洗速度淋洗1.6min，之后利用甲醇进行洗脱，具体程序为，甲醇以0.15mL/min的淋洗速度淋洗2.6min，最后先后通过水—甲醇进行冲洗，具体程序为，水以5mL/min的淋洗速度淋洗2.8min，而后甲醇以5mL/min的淋洗速度淋洗3.0min，其中所述的缓冲溶液为磷酸盐水溶液、醋酸盐水溶液、柠檬酸盐水溶液中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征是，所述质谱采用离子化电喷雾，电喷雾离子源为HESI-II，毛细管温度为350℃，鞘气流速50L/min，辅助气流速6L/min，吹扫气流速3L/min，喷雾电压为3KV，透镜电压为50V，采用正离子和负离子模式分别采集数据或者正负离子同时切换采集数据，一级全扫描的分辨率R=70000，扫描范围100~1000m/z。

4.根据权利要求2所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征是，所述待测牛奶样品的制法为：（1）将待测牛奶与蛋白沉淀剂混合均匀，向混合均匀后的溶液中加入缓冲溶液，调节pH至3.5~7.5，（2）将步骤（1）得到的混合物离心、过滤，收集上清液，即为待测牛奶样品。

5.根据权利要求4所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征是，具备以下任意一种或者几种优选条件，所述蛋白沉淀剂的加入量为待测牛奶加入重量的0.2~5倍；所述蛋白沉淀剂优选为乙酸锌水溶液、乙酸铅水溶液、乙酸铵溶液、三氯乙酸溶液、甲醇、乙腈或者冰乙酸水溶液中的任意一种；所述缓冲溶液的加入量为待测牛奶加入重量的0.1~0.5倍；待测牛奶样品制法中缓冲溶液为磷酸盐水溶液、醋酸盐水溶液或者柠檬酸盐水溶液中的任意一种；所述离心条件为600~3000r/min，离心时间为3~8min。

6.权利要求1~5中任一牛奶中抗生素残留的检测方法在牛奶抗生素残留定量检测中的应用。

7.权利要求1~5中任一牛奶中抗生素残留的检测方法在牛奶抗生素残留监测中的应用。