[发明专利]一种鹿角海萝多糖

权利要求书

1.一种鹿角海萝多糖，其特征在于，所述鹿角海萝多糖的重均相对平均分子量为7.72E+04，且由葡萄糖-6-硫酸基-β-D-半乳糖（l→4）-3，6-内醚-α-L-半乳糖（1→3）重复结构构成；所述鹿角海萝多糖中葡萄糖与半乳糖的摩尔比为1：1.86。

2.根据权利要求1所述鹿角海萝多糖，其特征在于，由如下方法制备得到：

S1.提取鹿角海萝粗多糖：

S11.取鹿角海萝干粉，加入乙醇进行脱脂除色，控制温度在70～90 ℃，料液比为1：40～1：60条件下油浴4h；

S12.将S11得到的溶液离心，上清液浓缩后加入无水乙醇，4～6 ℃放置过夜；

S13.将S12得到的溶液离心，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，烘干，得鹿角海萝粗多糖；

S2.分离鹿角海萝精多糖：

S21.鹿角海萝粗多糖经木瓜蛋白酶酶解后，加入三氯乙酸4～6℃过夜，去沉淀；

S22.将S21得到的溶液加碱中和，透析，浓缩，干燥，得鹿角海萝精多糖；

S3.纯化鹿角海萝纯多糖：

S31.将鹿角海萝精多糖上DEAE-琼脂糖凝胶柱，水洗、盐洗、浓缩、除盐、干燥，经G-100凝胶柱层析，检测收集纯多糖流份；

S32.将S31收集的纯多糖流份浓缩、干燥，得鹿角海萝纯多糖，即权利要求1所述鹿角海萝多糖。

3.根据权利要求2所述鹿角海萝多糖，其特征在于，步骤S11所述乙醇的浓度为70～80v/v%，用量为鹿角海萝干粉体积的15～20倍；所述油浴是使用硅油；

步骤S12所述离心为1500～3000 rpm离心10～15min，所述无水乙醇的用量为浓缩后上清液体积的3～4倍；

步骤S12所述浓缩是在50～60℃条件下，将上清液浓缩至原体积的1/5～1/6；

步骤S13所述离心为3000～4000 rpm离心10～15min；

步骤S13所述烘干为50～60℃烘干至无乙醚味。

4.根据权利要求2所述鹿角海萝多糖，其特征在于，步骤S21所述酶解是在pH 6.8～7.0条件下，使用终浓度为1～1.5w/v%的木瓜蛋白酶，50～60℃酶解反应2～3 h，再升温至90～100℃后终止反应；

步骤S21所述三氯乙酸的体积浓度为4～5%，三氯乙酸与鹿角海萝粗多糖溶液的体积比为1:1～1:1.2；

步骤S22所述浓缩为50～60 ℃浓缩至原液体积的1/15～1/16。

5.根据权利要求2所述鹿角海萝多糖，其特征在于，步骤S2的具体操作为：

按照鹿角海萝粗多糖与蒸馏水质量体积比为1～2：100～200 g/mL的比例，将鹿角海萝粗多糖溶于蒸馏水中，加入终浓度为1～1.5w/v%的木瓜蛋白酶，控制酶解温度为50～60℃，溶液的pH为6.8～7.0，酶解2～3 h后，再升高温度至90～100℃后终止反应；按照1:1～1:1.2的体积比，在上述反应后的溶液中加入三氯乙酸，搅拌均匀，4～6℃过夜，去沉淀，加入2～4 mol/L NaOH中和，透析，收集透析液于50～60℃浓缩至原液1/15 ～1/16，冷冻干燥，得鹿角海萝精多糖；

步骤S3的具体操作为：取15～20 mg/mL的鹿角海萝精多糖溶液10～15mL，上DEAE-琼脂糖凝胶柱CL-6B，先用蒸馏水洗1.5～2倍柱体积，再分别用200～300 mL的0.1～0.75mol/L NaCl进行梯度洗脱，流速为1.5～2 mL/min，收集多糖组分用50～60℃水浴浓缩、双蒸水透析、除盐，再50～60℃水浴浓缩，冷冻干燥得多糖；将所得多糖溶于蒸馏水中继续经Sephadex G-100柱，以蒸馏水为流动相纯化，流速0.1～0.2 mL/min，检测收集纯多糖流份，浓缩、冷冻干燥，得鹿角海萝纯多糖。

6.权利要求1所述鹿角海萝多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述肿瘤为肝癌或食管癌；所述肝癌为肝癌细胞株HepG2，所述食管癌为食管癌细胞株EC109。