[发明专利]一种鹿角海萝多糖有效
申请号: | 201510255589.4 | 申请日: | 2015-05-19 |
公开(公告)号: | CN104910285B | 公开(公告)日: | 2017-06-23 |
发明(设计)人: | 石刚刚;陈一村;江泽斌;郑娇娇 | 申请(专利权)人: | 汕头大学医学院 |
主分类号: | C08B37/00 | 分类号: | C08B37/00;A61P35/00 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人: | 陈卫 |
地址: | 515041 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鹿角 多糖 | ||
1.一种鹿角海萝多糖,其特征在于,所述鹿角海萝多糖的重均相对平均分子量为7.72E+04,且由葡萄糖-6-硫酸基-β-D-半乳糖(l→4)-3,6-内醚-α-L-半乳糖(1→3)重复结构构成;所述鹿角海萝多糖中葡萄糖与半乳糖的摩尔比为1:1.86。
2.根据权利要求1所述鹿角海萝多糖,其特征在于,由如下方法制备得到:
S1.提取鹿角海萝粗多糖:
S11.取鹿角海萝干粉,加入乙醇进行脱脂除色,控制温度在70~90 ℃,料液比为1:40~1:60条件下油浴4h;
S12.将S11得到的溶液离心,上清液浓缩后加入无水乙醇,4~6 ℃放置过夜;
S13.将S12得到的溶液离心,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤,烘干,得鹿角海萝粗多糖;
S2.分离鹿角海萝精多糖:
S21.鹿角海萝粗多糖经木瓜蛋白酶酶解后,加入三氯乙酸4~6℃过夜,去沉淀;
S22.将S21得到的溶液加碱中和,透析,浓缩,干燥,得鹿角海萝精多糖;
S3.纯化鹿角海萝纯多糖:
S31.将鹿角海萝精多糖上DEAE-琼脂糖凝胶柱,水洗、盐洗、浓缩、除盐、干燥,经G-100凝胶柱层析,检测收集纯多糖流份;
S32.将S31收集的纯多糖流份浓缩、干燥,得鹿角海萝纯多糖,即权利要求1所述鹿角海萝多糖。
3.根据权利要求2所述鹿角海萝多糖,其特征在于,步骤S11所述乙醇的浓度为70~80v/v%,用量为鹿角海萝干粉体积的15~20倍;所述油浴是使用硅油;
步骤S12所述离心为1500~3000 rpm离心10~15min,所述无水乙醇的用量为浓缩后上清液体积的3~4倍;
步骤S12所述浓缩是在50~60℃条件下,将上清液浓缩至原体积的1/5~1/6;
步骤S13所述离心为3000~4000 rpm离心10~15min;
步骤S13所述烘干为50~60℃烘干至无乙醚味。
4.根据权利要求2所述鹿角海萝多糖,其特征在于,步骤S21所述酶解是在pH 6.8~7.0条件下,使用终浓度为1~1.5w/v%的木瓜蛋白酶,50~60℃酶解反应2~3 h,再升温至90~100℃后终止反应;
步骤S21所述三氯乙酸的体积浓度为4~5%,三氯乙酸与鹿角海萝粗多糖溶液的体积比为1:1~1:1.2;
步骤S22所述浓缩为50~60 ℃浓缩至原液体积的1/15~1/16。
5.根据权利要求2所述鹿角海萝多糖,其特征在于,步骤S2的具体操作为:
按照鹿角海萝粗多糖与蒸馏水质量体积比为1~2:100~200 g/mL的比例,将鹿角海萝粗多糖溶于蒸馏水中,加入终浓度为1~1.5w/v%的木瓜蛋白酶,控制酶解温度为50~60℃,溶液的pH为6.8~7.0,酶解2~3 h后,再升高温度至90~100℃后终止反应;按照1:1~1:1.2的体积比,在上述反应后的溶液中加入三氯乙酸,搅拌均匀,4~6℃过夜,去沉淀,加入2~4 mol/L NaOH中和,透析,收集透析液于50~60℃浓缩至原液1/15 ~1/16,冷冻干燥,得鹿角海萝精多糖;
步骤S3的具体操作为:取15~20 mg/mL的鹿角海萝精多糖溶液10~15mL,上DEAE-琼脂糖凝胶柱CL-6B,先用蒸馏水洗1.5~2倍柱体积,再分别用200~300 mL的0.1~0.75mol/L NaCl进行梯度洗脱,流速为1.5~2 mL/min,收集多糖组分用50~60℃水浴浓缩、双蒸水透析、除盐,再50~60℃水浴浓缩,冷冻干燥得多糖;将所得多糖溶于蒸馏水中继续经Sephadex G-100柱,以蒸馏水为流动相纯化,流速0.1~0.2 mL/min,检测收集纯多糖流份,浓缩、冷冻干燥,得鹿角海萝纯多糖。
6.权利要求1所述鹿角海萝多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述应用,其特征在于,所述肿瘤为肝癌或食管癌;所述肝癌为肝癌细胞株HepG2,所述食管癌为食管癌细胞株EC109。
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