[发明专利]一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用

权利要求书

1.一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

I.聚丙烯酰胺凝胶的制备

用12％的聚丙烯酰胺凝胶分离待测片段；根据玻璃板规格的不同，分别配制7ml、10ml的胶，配方为：

II.样品的制备

1、设计引物，样品片段长度一般应在150-300bp之间；

所述引物为：

forward：5′-CGACAAGGCGACGGTGAA-3′

reverse：5′-TGGGGCAGGAAGGAGTTT-3′；

2、PCR扩增目的片段，琼脂糖凝胶检测；

3、样品稀释：根据琼脂糖凝胶检测结果，如果PCR产物很浓，则将PCR产物稀释3倍；若PCR产物浓度较弱，则不稀释；

4、取1μl稀释好的PCR产物，加入9ul变性缓冲液中，混匀；

5、变性缓冲液：溴酚蓝5mg，0.5M EDTA.Na2 pH8.0 400μl，甲酰胺9.6ml，混匀；

III.变性

1、开启PCR仪，将程序设置为98℃11min；

2、将混有甲酰胺的样品放入PCR仪中，开始变性；

3、准备冰盒；

4、当变性10min时，打开PCR仪，迅速将样品插入冰中，保持10min；

IV.上样电泳

1、电泳前，所用的胶，电泳缓冲液都要先预冷；

2、取样品3μl，依次点到事先制好并且制冷的聚丙烯酰胺凝胶中；点样时注意标准品不要点到胶的最边上两个孔，以免由于制胶不均匀或其他原因造成的标准品分型不好，起不到指示作用；

3、将电泳槽放到4℃冰箱中，连上电泳仪，250V跑10min，50V 16h；

4、电泳条件因待分离片段的不同而不同，因此若以上条件不能够将不同的基因型分开，则尝试其他的条件；

V.染色

1)固定：把胶卸下，做好起始记号，放入80ml固定液中在摇床上固定10min；

2)染色：60ml染色液+60μl甲醛，染色6min，蒸馏水洗涤一次；

3)显色：60ml显色液+120μl甲醛，放到摇床上显色至条带清晰；倒掉显色液，加蒸馏停止显色。

2.权利要求1所述遗传标记在拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量选择中的应用。