[发明专利]一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于禽类遗传标记技术领域，涉及一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用，具体地说，涉及一种拜城油鸡(白羽)腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高，对肉品质量和口味也有更严格的要求，鸡肉作为餐桌上的主要肉类，鸡肉的品质越来越成为人们关注的焦点。对于鸡肉肉质好坏的衡量标准大多源自于人们的口感，目前还没有一种统一的标准。经过分析，鸡肉中的高肌内脂肪IMF被认为是一种影响鸡肉肉质性状和改善肉的鲜嫩度方面的主要指标，当高肌内脂肪含量达到3.5％以上，就能获得良好的肉质风味。

随着分子生物的发展，人们尝试通过遗传标记能够在高肌内脂肪含量选择中得到应用，遗传标记Genetic Marker指可追踪染色体、染色体某一节段、某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性。它具有两个基本特征，即可遗传性和可识别性，因此生物的任何有差异表型的基因突变型均可作为遗传标记。

目前需要一种准确、可靠地遗传标记用于拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量选择中。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用。其具体技术方案为：

一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记制备方法，包括以下步骤：

I.聚丙烯酰胺凝胶的制备

用12％的聚丙烯酰胺凝胶分离待测片段。根据玻璃板规格的不同，分别配制7ml、10ml的胶，配方为：

II.样品的制备

1、设计引物，样品片段长度一般应在150-300bp之间；

2、PCR扩增目的片段，琼脂糖凝胶检测；

3、样品稀释：根据琼脂糖凝胶检测结果，如果PCR产物很浓，则将PCR产物稀释3倍；若PCR产物浓度较弱，则不稀释；

4、取1μl稀释好的PCR产物，加入9ul变性缓冲液中，混匀；

5、变性缓冲液：溴酚蓝5mg，0.5M EDTA.Na2pH8.0400μl，甲酰胺9.6ml，混匀；

III.变性

1、开启PCR仪，将程序设置为98℃11min；

2、将混有甲酰胺的样品放入PCR仪中，开始变性；

3、准备冰盒；

4、当变性10min时，打开PCR仪，迅速将样品插入冰中，保持10min；

IV.上样电泳

1、电泳前，所用的胶，电泳缓冲液都要先预冷；

2、取样品3μl，依次点到事先制好并且制冷的聚丙烯酰胺凝胶中；点样时注意标准品不要点到胶的最边上两个孔，以免由于制胶不均匀或其他原因造成的标准品分型不好，起不到指示作用；

3、将电泳槽放到4℃冰箱中，连上电泳仪，250V跑10min，50V 16h；

4、电泳条件因待分离片段的不同而不同，因此若以上条件不能够将不同的基因型分开，则尝试其他的条件；

V.染色

1)固定：把胶卸下，做好起始记号，放入80ml固定液中在摇床上固定10min；

2)染色：60ml染色液+60μl甲醛，染色6min，蒸馏水洗涤一次；

3)显色：60ml显色液+120μl甲醛，放到摇床上显色至条带清晰。倒掉显色液，加蒸馏停止显色。

本发明所述遗传标记在拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量选择中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明经过实验可知，本发明所述方法制备的遗传标记选择腿肌中IMF含量高的拜城油鸡(白羽)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

本发明选取120日龄拜城油鸡(白羽)60只，公母各半，检测H-FABP第二外显子多态性和腿肌中肌内脂肪(IMF)的含量，并分析两者之间的关系。

PCR引物

5′-CGACAAGGCGACGGTGAA-3′(forward)

5′-TGGGGCAGGAAGGAGTTT-3′(reverse)

1)PCR反应体系：

2)PCR反应程序：

SSCP实验步骤

I.聚丙烯酰胺凝胶的制备