[发明专利]一种具有天然水平糖胺聚糖的脱细胞基质及其制备与应用

权利要求书

1.一种具有天然水平糖胺聚糖的脱细胞基质的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

(1)对天然生物组织进行脱细胞处理，得到脱细胞基质；

(2)检测脱细胞基质中糖胺聚糖的丢失量；

(3)借助脱细胞基质中天然成分接入补充糖胺聚糖，得到具有天然水平糖胺聚糖的脱细胞基质。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的天然生物组织为异种、同种异体或自体的天然脂肪组织、软骨组织、血管组织、真皮组织、肝脏组织、肾脏、输尿管和生物膜中的至少一种；

步骤(2)和步骤(3)中所述的糖胺聚糖包括透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、肝素和硫酸角质素中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的脱细胞处理包括如下步骤：利用制备脱细胞基质的方法中的至少一种对天然生物组织进行脱细胞处理；

所述的制备脱细胞基质的方法包含如下方法：通过酶破坏细胞得到脱细胞基质的酶消化法；通过物理方式破坏细胞得到脱细胞基质的物理法；通过化学试剂裂解细胞得到脱细胞基质的化学法。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：

所述的酶包括蛋白酶、核酸酶和磷脂酶中的至少一种；

所述的物理方式包括冷冻、高压、超声波、机械震荡、反复冻融和渗透压改变中的至少一种；

所述的化学试剂包括酸、碱、螯合剂和表面活性剂中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述的脱细胞处理包括如下步骤：对天然生物组织进行预处理，使其处于无菌状态；接着利用制备脱细胞基质的方法中的至少一种对天然生物组织进行脱细胞处理；

所述的预处理包括如下的步骤A，或步骤A和步骤B，或步骤A～C：

A、用含抗生素的生理缓冲液对天然生物组织进行清洗、消毒、分离；

B、用低渗或等渗溶液浸泡用抗生素处理过的天然生物组织；

C、震荡和调节洗涤温度，超声波处理。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(3)中所述的接入方法为物理共混、化学交联、离子键合和化学接枝中的一种或一种以上；

所述的物理共混是利用高分子试剂的分子缠绕、盐键、氢键及疏水作用使糖胺聚糖分布于脱细胞基质的表面以及内部；

所述的高分子试剂包含水凝胶、聚电解质中的一种或两种；

所述的化学交联是在交联剂的作用下，脱细胞基质中大分子与糖胺聚糖链间通过化学键联结起来，形成网状或体形结构；

所述的交联剂包含1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳酰二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、1,1-羰基二咪唑、京尼平、氧化海藻酸钠、戊二醛、多醛基葡聚糖和辣根过氧化物酶中的至少一种；

所述的离子键合是在脱细胞基质上接入高分子，通过高分子与糖胺聚糖间的离子键反应，将糖胺聚糖接入脱细胞基质中；

所述的高分子包括盐酸十六烷基胺和聚氨酯中的至少一种；

所述的化学接枝是利用高分子试剂，使脱细胞基质表面的反应基团与糖胺聚糖直接或间接发生化学反应，实现表面接枝；

所述的高分子试剂包含氨基酸，1,4-丁二醇缩水甘油醚，β-硫酸酯乙砜基苯胺和溴化氰中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的糖胺聚糖的检测方法包含定性检测法和定量检测法；所述的定性检测法包含：组织化学染色法和免疫组化染色法中的至少一种；所述的定量检测法包括：Dubious法、Carbazole法、Elson-Morgan法、ELISA法和电泳法中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：

所述的组织化学方法是利用染色剂对组织中的糖胺聚糖进行染色，再测定组织的吸光度来对糖胺聚糖进行定性和定量分析；

所述的染色剂包含阿利新蓝、1,9-二甲基亚甲蓝和天青A中的至少一种；

所述的免疫组化染色法是利用荧光标记抗体标记组织中的成分，从而对成分进行定性分析；

所述的荧光标记抗体优选为5-氨基荧光素；

所述的电泳法是指对糖胺聚糖进行电泳，并将泳动位置与标准品对比来对糖胺聚糖进行定性分析。