[发明专利]一种干细胞外泌体补片及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种干细胞外泌体补片的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)培养干细胞并收集干细胞的外泌体；

(2)制备补片支架；

(3)将步骤(1)得到的外泌体附着到补片支架上，制得干细胞外泌体补片。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述的干细胞为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞中的一种或一种以上；

所述的干细胞的外泌体指的是干细胞分泌的分子直径为30～100nm的亚细胞双层囊膜泡。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：

所述的干细胞为胚胎干细胞、诱导性多潜能分化细胞、间充质干细胞、脂肪干细胞、羊膜干细胞、角膜缘干细胞、心脏干细胞、皮肤干细胞、血管内皮祖细胞、神经干细胞、造血干细胞、成体干细胞和经血干细胞中的一种或一种以上；

所述的干细胞的外泌体内含有用于体内或体外发挥信息传递、调控、转运、免疫的蛋白、核酸、酶和细胞因子中的一种或一种以上。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述的收集的方法指的是通过收集培养上清液，经过离心法、色谱法、过滤法、免疫磁珠法和物理吸附法中的一种或一种以上方法进行外泌体的收集；

所述的补片的载体为天然载体或合成载体；

所述的外泌体附着在补片支架上指利用凝胶混悬法、交联剂法、带电吸附法和致孔注入法中的一种或一种以上的方法制备获得。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

所述的离心法为超速离心、差速离心、超滤离心、密度梯度离心和旋转超滤中的一种或一种以上的方法进行外泌体的收集；

所述的色谱法指利用凝胶层析法、吸附层析法和离子交换法中的一种或一种以上的方法分离出完整的外泌体的收集方法；

所述的免疫磁珠法指将含有外泌体相关抗原的抗体的免疫磁珠与外泌体共同孵育，用蒸馏水冲洗后，放入PBS缓冲液中的收集方法；

所述的抗体为CD63、CD81、CD90、CD73、CD105、CD29、CD166和CD9中的一种或一种以上；

所述的物理吸附法为静电吸附和磁力吸附中的一种或一种以上的收集方法；

所述的过滤法指利用纳滤膜和超滤膜中的一种或一种以上的膜将不同分子量或粒径的分子分离得到外泌体的方法。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

所述的天然载体为由基质胶、胶原凝胶、壳聚糖、明胶、脱细胞基质、动物腹膜、氨基葡聚糖任何一种或一种以上的天然材料制备获得；

所述的脱细胞基质为脱细胞角膜基质、脱细胞皮肤基质或脱细胞心脏基质形成的天然载体材料；

所述的合成载体为由乙烯-醋酸乙烯共聚物、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸、藻酸盐和聚己内酯中的一种或一种以上的合成材料制备获得。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

所述的凝胶指的是纳米纤维凝胶、纳米多肽凝胶、纤维蛋白凝胶、交联葡聚糖凝胶、胶原凝胶、明胶、壳聚糖凝胶和琼脂糖凝胶中的一种或一种以上；

所述的交联剂指的是1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、糖胺聚糖、京尼平和戊二醛中的一种或一种以上；

所述的带电吸附法指的是利用外泌体质膜表面带电的特性将其吸附到带电情况相反的带电补片载体上的方法；

所述的致孔注入法指利用致孔剂使补片载体内部成孔，再通过超饱和气体法、超临界流体致孔法、热致相分离法和微乳液聚合法中的一种或一种以上的方法去除致孔剂，而使外泌体留在补片载体内的孔中的方法。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：

所述的带电补片载体指的是将天然带电的壳聚糖、肝素附着在补片载体形成的补片载体；

所述的致孔剂为氮气、二氧化碳、水、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇中的一种或一种以上。

9.一种干细胞外泌体补片，通过权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到。

10.权利要求9所述的干细胞外泌体补片在组织工程领域中的应用。