[发明专利]快速定量检测ST2和NT-proBNP的免疫荧光试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于临床医学诊断领域，具体涉及一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)和N末端脑钠肽(NT-proBNP)的免疫荧光试纸条及其制备方法。

背景技术

可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)基因是1989年由Tominaga等首先在BALB/c-3T3细胞系中得到的，是I L-1(白细胞介素1)受体家族成员之一，该基因表达两种蛋白产物：一种带有跨膜结构，称为跨模型ST2(ST2L)，一种可以分泌到细胞外，称为分泌型ST2(sST2)。研究发现ST2可由心脏成纤维细胞和心肌细胞表达，是生物机械应力诱导产生的一种心肌蛋白。ST2基因表达于肥大细胞激活的辅助性T细胞2(Th2)巨噬细胞和心肌细胞。人的ST2基因约40kb，位于人类染色体2q12，可编码一种可溶性蛋白(sST2)和一种跨膜形式蛋白(ST2L)，两者的转录分别受到不同的启动子调控。

研究表明sST2是IL-33的诱骗受体，它可以与IL-33结合，从而阻断IL-33与ST2L结合，继而削弱IL-33/ST2L信号通路的心血管保护作用在心肌受到过度牵拉造成损伤的过程中，大量sST2生成使心肌缺乏足够的IL-33的保护，从而加速心肌重构和心室功能障碍，最终导致死亡风险增高。IL-33是IL-1家族成员，可以与靶细胞上的膜受体结合后介导下游信号通路，或者被运输到靶细胞的细胞核作为DNA结合因子行使功能。研究表明，机械应力可刺激心脏成纤维细胞产生IL-33，与其受体复合物(由ST2L和IL-1RAcP组成)结合后，将活化信号传递至细胞内，经过下游的IL-1相关蛋白激酶髓样分化因子88和肿瘤坏死因子受体相关因子6等一系列信号分子，激活核转录因子κB(nuclear factorκB，NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)，从而调节基因转录，导致Th2细胞效应分子IL-5IL-4和IL-13等的释放。当心脏成纤维细胞和心肌细胞受到过大的压力负荷时，这些效应分子可以使心脏作出适应性反应，防止过度牵拉导致的心肌肥大和心肌纤维化发生。与此同时，心肌sST2大量生成，sST2与IL-33结合后竞争性抑制其与ST2L结合，阻断经ST2L的信号传导，最终抑制NF-B和MAPK激活，从而大大降低IL-33/ST2L信号通路的内源性心肌保护作用。ST2能够独立的判断心力衰竭预后，结合NT-proBNP时，其对心衰的诊断,治疗,及预后的敏感性和特异性均高于ST2和NT-proBNP单独诊断的结果，其中NT-proBNP是指N末端脑钠肽，脑钠肽(B-type-Natriuretic Peptide,BNP)由日本学者Sudoh等于1988年首先在猪脑中发现，而Hunt等在1995年第一次对N-端脑钠肽前体(N-terminal-pro-BNP,NTproBNP)进行了描述。BNP主要由左心室分泌，在心肌细胞受到容量负荷和压力负荷增高时，非活性前体Pro-BNP裂解为活性BNP和非活性的NT-proBNP。2000年11月美国食品药物管理局批准美国Biosite公司的BNP检测应用于临床，发展到今天，美国心脏协会(AHA)和欧洲心脏病学会(ESC)等全球心血管权威机构以及美国临床生化学院(NACP)在其制订的“心衰诊断和治疗指南”及“心脏标志物的应用指南”中，把BNP/NT-proBNP列为不可缺少的心脏标志物，以指导心衰的治疗。NT-proBNP能客观反映充血性心力衰竭(CHF)及严重程度，其血浆水平随心衰程度增加而增高，能更好地辅助诊断心衰分级。超声判断CHF的金标准是左室射血分数(LVEF)下降，而血清NT-proBNP水平升高则预示左室射血功能的减退更加严重，甚至比超声检查更具优越性。

免疫荧光技术(Fluorescence Immunoassay technique)是以荧光分子作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。生物素－亲合素系统(Biotin-Streptavidin—System，BAS)是一种非常有效的生物反应放大系统。生物素—亲合素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。生物素—亲合素与标记试剂高亲合力的牢固结合及多级放大效应，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。BAS在实际应用中所具有的巨大优越性，主要表现在以下几个方面：