[发明专利]一种定量检测样本中脂蛋白磷脂酶A2浓度的液态芯片试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外免疫检测技术领域，具体涉及一种检测样本中脂蛋白磷脂酶A2浓度测定的试剂盒及其制备方法。

背景技术

Lp-PLA2属于磷脂酶A2超家族，是由441个氨基酸残基组成的一种丝氨酸脂酶，相对分子量为45kD。与磷脂酶A2家族其余成员不同的是，Lp-PLA2不需要钙离子维持其催化活性，其具有降解血小板活化因子的活性，因此也被称为血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-activating factor acetylhydrolase，PAF-AH)。血液中Lp-PLA2主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，在动脉粥样硬化部位大量存在,并可被炎症介质调节。具有活性的Lp-PLA2能优先水解氧化磷脂sn-2位上短脂酰链中的酯键而生成两种强促炎介质——氧化游离脂肪酸和溶血卵磷脂。这两种炎性介质可作为单核细胞趋化因子，诱导单核细胞的活化，在动脉粥样硬化的发生、发展中具有一定的作用。大量流行病学研究显示Lp-PLA2是一种可以预测与冠脉事件有关的动脉粥样硬化和脑中风危险的酶，其作为一种独立的炎性因子，具有促进动脉粥样硬化的作用。

目前对于心血管疾病的免疫诊断方法，只能对一种单一的指标进行检测，由于不同指标存在的灵敏度、精确度以及特异性的差别，在临床诊断中经常出现高的假阴性率。本发明在新的技术平台上，通过双抗夹心法对LP-PLA2的浓度进行准确定量，同时能够与不同的标志物进行自由组合，达到多种标志物的同时检测，提高心血管疾病检测的准确性，降低临床检测中的假阴性率。

发明内容

本发明相对于传统的免疫测定法，旨在提供高通量、快速、准确的可同时检测多种心血管标志物的技术平台和试剂盒。

一种定量检测样本中脂蛋白磷脂酶A2浓度的液态芯片试剂盒，包括包被有抗脂蛋白磷脂酶A2的单克隆抗体的微球、平台载体、脂蛋白磷脂酶A2的梯度浓度标准品、脂蛋白磷脂酶A2的质控品、生物素标记的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体、链霉亲和素化的藻红蛋白(SAPE)、样本缓冲液。

作为优选方案，所述微球为表面带有荧光色的聚苯乙烯磁微球，带孔的平台载体里面包被有1000-5000个微球/孔，而每个微球含有2*10^-6-5*10^-5μg的抗脂蛋白磷脂酶A2的单克隆抗体。

作为优选方案，所述带孔的平台载体为微孔反应板。

作为优选方案，所述脂蛋白磷脂酶A2的梯度浓度标准品和脂蛋白磷脂酶A2的质控品都是用脂蛋白磷脂酶A2纯品与自制的标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释而成，所述标准品不少于2个，所述质控品和所述标准品的区别只是浓度不同，所述质控品的作用是在试剂盒使用过程中起到核准校对的作用，即通过质控品测值是否在质控范围内来对标准品拟合出来的曲线进行核准校对，若质控品测值合格，则可以利用标准曲线来拟合出样本中的脂蛋白磷脂酶A2的浓度值。

作为优选方案，所述脂蛋白磷脂酶A2纯品是人血浆提纯的天然脂蛋白磷脂酶A2蛋白或大肠杆菌表达的重组脂蛋白磷脂酶A2蛋白。

作为优选方案，所述的标准品稀释液，是在pH 7.0-7.4、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.05-1％质量分数的表面活性剂混合而成。

作为优选方案，所述样本缓冲液是在10-100mM的磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。

作为优选方案，所述生物素标记的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体中的任意一种。

作为优选方案，所述的表面活性剂为曲达通X-100、吐温20、布里杰-35、吐温40、吐温60、吐温80、十二烷基磺酸钠、斯盘20、烷基酚聚氧乙烯4醚、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000。

作为优选方案，所述的防腐剂为Proclin 300、叠氮钠、硫柳汞、硫酸庆大霉素。

作为优选方案，所述的蛋白保护剂为牛血清白蛋白、牛γ蛋白、海藻糖、甘油、蔗糖。

制备所述试剂盒的方法，包括以下制备过程，所述制备过程不分先后：