[发明专利]一种胶体碳标记抗体的制备方法及使用其制备的试纸条

权利要求书

1.一种胶体碳标记抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，

1)将炭黑分散到缓冲液中，冰浴超声10-40min，得到均匀分散的胶体碳溶液；优选的，冰浴超声20min。

2)将沙丁胺醇抗体用缓冲液稀释至0.1-1mg﹒mL^-1；优选的，0.5mgmL^-1；

3)在搅拌速度50～150rpm条件下将沙丁胺醇抗体加入到胶体碳溶液中，在0-25℃下，搅拌速度50～150rpm条件下搅拌10～15h得到胶体碳标记抗体；优选的，4℃下搅拌；

4)用硼酸盐缓冲液洗涤胶体碳标记抗体，重复2-5次，于2000-15000r/min，0-25℃，离心10-40min；将最终沉淀用洗涤缓冲液稀释至最初体积，0-25℃保存备用；优选的，用硼酸盐缓冲液洗涤胶体碳标记抗体，重复3次，于12000r/min，10℃，离心30min；将最终沉淀用硼酸盐缓冲液重悬至最初体积，4℃保存备用。

2.根根据权利要求1所述的胶体碳标记抗体的制备方法，其特征在于：步骤1)以及步骤2)中，所述缓冲液均为硼酸盐缓冲液，且其pH为8.8。

3.根据权利要求1或2所述的胶体碳标记抗体的制备方法，其特征在于：步骤3)中，沙丁胺醇抗体的浓度为60-350μg﹒mL^-1；胶体碳的浓度为0.5-1.5mg﹒mL^-1。

4.根据权利要求3所述的胶体碳标记抗体的制备方法，其特征在于：步骤3)中，沙丁胺醇抗体的浓度为80μg﹒mL^-1；胶体碳的浓度为0.6mg﹒mL^-1。

5.一种使用如权利要求1～4任一项所述的制备方法制备的胶体碳标记抗体的制备的试纸条，其特征在于：包括如下组装步骤，

1)取一定量的稀释的胶体碳标记抗体溶液，加入微孔板的微孔中，在0～-40℃条件下真空冷冻干燥1-20h；优选的，在-21℃条件下真空冷冻干燥12h；优选的，取10μL稀释倍数为10倍的胶体碳标记抗体溶液；

2)向微孔中加入100-200μL标准品，快速混合均匀，置于室温孵育1-5min，将半组装的试纸条插入到微孔中，5-15min即可观察试纸条检测结果；优选的，向微孔中加入120μL标准品，快速混合均匀，置于室温孵育3min，将组半组装的试纸条插入到微孔中，10min后读取结果；优选的，标准品是由pH值为8.8，离子强度为0.1mol L^-1的硼酸盐缓冲液配制而成，且其中含有质量浓度为1.0％牛血清白蛋白、0.05％吐温-20、0.1％PEG-200。

6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于：步骤2)中，所述半组装的试纸条的材质为硝酸纤维素膜，优选的，Whatman公司的HF135型号；且半组装的试纸条上固定有包被抗原、羊抗兔二抗，所述羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜质控线上；所述包被抗原在检测线上。

7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上包被抗原的稀释倍数为5倍，其使用的稀释液为磷酸盐缓冲液，且其pH值为7.4。

8.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上羊抗兔二抗的稀释倍数为150倍，其使用的稀释液为硼酸盐缓冲液。

9.如权利要求1～4任一项所述的制备方法制备的胶体碳标记抗体在沙丁胺醇检测中的应用。

10.如权利要求5～8任一项所述的试纸条在沙丁胺醇检测中的应用。