[发明专利]一种胶体碳标记抗体的制备方法及使用其制备的试纸条

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留快速检测领域，尤其是涉及一种胶体碳标记抗体的制备方法及使用其制备的试纸条。

背景技术

免疫层析分析方法具有灵敏度高、操作简便、省时省力、成本低廉，适用于大量样本的快速现场筛选等优势，近年来在兽药残留检测领域得到了快速的发展。胶体金具有生物兼容性好，不同粒径可呈现不同的颜色，易于通过改性提高信号强度等优势，成为免疫层析分析方法中最常用的标记材料。但是胶体金价格昂贵，批间差异大，不利于实现试纸条的批量生产。胶体金免疫层析技术对抗体、包被原等材料的要求比较高，而且胶体金的信号较弱，限制了其应用。

炭黑又名碳黑，是一种具有局部石墨化结构的无定形碳，是由烃类物质(包括天然气、燃料油、重油等)在不完全燃烧或者热裂解条件下制得的产物。其主要组成元素为碳元素，碳质量分数为90％-99％，同时还含有少量氢、氧、硫、氮等元素。炭黑以近似于球体的胶体原生粒子以及聚集体形式存在，外观为黑色粉末状固体，其基本粒子尺寸在10-100nm之间，通常情况下，炭黑粒子不是独立存在的，而是由多个粒子通过碳晶层相互穿插，形成链枝状的稳定结构。炭黑的前体性质以及合成方法决定了炭黑的粒径大小、粒径分布以及表面化学特性。

由德国Degussa公司生产的SB4型号炭黑是普通黑度气法炭黑，经过氧化处理。氧化处理使炭黑表面及内部O元素含量升高，表面引入了具有良好亲水性能的含氧酸性基团，如羧基、羟基、醛基等，通过引入这些官能团，提高了炭黑在水溶液中的分散稳定性，使得炭黑在不需要稳定剂和表面活性剂的条件下就能形成稳定的胶体状分散液。

1993年Van Amerongen A等人首次将SB4炭黑用作标记物使用，为炭黑的应用开辟了新的领域。SB4炭黑具有很大的比表面积，在水性体系中分散性良好，在缓冲液中抗体等大分子物质可以通过表面吸附等物理作用与胶体碳相结合，这种标记方式属于物理吸附，不会改变抗体的活性和特异性。2009年Blazkova M等人将胶体碳作为标记物，建立了检测地表水中灭虫威的免疫层析试纸条方法。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种胶体碳标记抗体的制备方法及免疫层析分析方法，可以可视化快速检测沙丁胺醇残留，以解决胶体金标记免疫层析分析方法成本较高，批间差异大，信号强度较弱等问题。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种胶体碳标记抗体的制备方法，包括如下步骤，

1)将炭黑分散到缓冲液中，冰浴超声10-40min，得到均匀分散的胶体碳溶液；优选的，冰浴超声20min。

2)将沙丁胺醇抗体用缓冲液稀释至0.1-1mg mL^-1；优选的，0.5mg mL^-1；

3)在搅拌速度100rpm条件下将沙丁胺醇抗体加入到胶体碳溶液中，在0-25℃下，搅拌速度100rpm条件下搅拌12h得到胶体碳标记抗体；优选的，4℃下搅拌；

4)用硼酸盐缓冲液洗涤胶体碳标记抗体，重复2-5次，于2000r/min-15000r/min，0-25℃，离心10-40min；将最终沉淀用洗涤缓冲液稀释至最初体积，0-25℃保存备用；优选的，用洗涤缓冲液洗涤胶体碳标记抗体，重复3次，于12000r/min，10℃，离心30min；将最终沉淀用硼酸盐缓冲液重悬至最初体积，4℃保存备用。

优选的，步骤1)以及步骤2)中，所述缓冲液均为硼酸盐缓冲液，且其pH为8.8。

优选的，步骤3)中，沙丁胺醇抗体的浓度为60-350μg mL^-1；胶体碳的浓度为0.5-1.5mg mL^-1。

优选的，步骤3)中，沙丁胺醇抗体的浓度为80μg mL^-1；胶体碳的浓度为0.6mg mL^-1。

本发明还提供了一种使用如上所述的制备方法制备的胶体碳标记抗体的试纸条，包括如下组装步骤，

1)取一定量的稀释的胶体碳标记抗体溶液，加入微孔板的微孔中，在0--40℃条件下真空冷冻干燥1-20h；优选的，在-21℃条件下真空冷冻干燥12h；