[发明专利]一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，具体的说，本发明涉及一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法。

背景技术

玛咖(Lepidium meyenii Walp)为十字花科独行菜属植物,原产于安第斯山脉，我国云贵高原和青藏高原均有引种。具有提高生育力、改善性功能、抗疲劳和增强免疫等功效[1]，近年来研究发现，其主要活性成分为玛咖酰胺、玛咖烯和芥子油苷等[2]。2011年玛咖粉被卫生部列为新资源食品[3]，具有广泛的开发市场和应用前景。

芥子油苷又称为硫代葡萄糖苷，是仅在十字花科植物中发现的一种次生代谢产物，玛咖药材中芥子油苷含量约为1％，其中苄基芥子油苷为其主要活性成分及其特征物质。目现有的方法是利用硫酸酯酶(sulfatase enzyme)将苄基芥子油苷催化水解为苄基脱硫硫代葡萄糖苷(Desulfoglucotropaeolin)，用HPLC进行分析定量，但是该方法的标准品存在问题，苄基脱硫硫代葡萄糖苷无法购买，目前只能采用丙烯基芥子油苷同步水解，定量分析后系数换算来解决标准品问题，不仅没有针对性，而且检测过程复杂繁琐，增加了方法的不确定度。

本方法利用葡糖硫苷酶(thioglucosidase)将苄基芥子油苷催化水解为异硫氰酸苄酯(BITC)，利用BITC简便的HPLC分析条件，建立苄基芥子油苷快速定量分析检测方法。方法的原理见下式：

[1]余龙江，金文闻，吴元喜，等.玛咖的植物学及其药理作用研究概况[J].天然产物研究与开发,20002,14(5):71-74

[2]金文闻.药食两用植物玛咖(Lepidium meyenii)的功效物质研究[D].武汉：华中科技大学，2007

[3]中华人民共和国卫生部

[4]转基因植物及其产品食用安全检查-抗营养素第三部分：硫代葡萄糖苷的测定[S].NY/T1103.3-2006

[5]Matthew W.Bernart.Thioglucosidase-Catalyzed Hydrolysis of the Major Glucosinolate of Maca(Lepidium meyenii)to Benzyl Isothiocyanata.American Chemical Society 2006:157-169 

发明内容

本发明的目的是提供一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法，该方法是以苄基芥子油苷为指标成分，通过对其定量测定来进行的。

优选地，所述定量是通过使用高效液相色谱法来进行的。

更优选地， 

a.色谱条件的建立

色谱柱：C18柱(4.6×250mm,5μm)；

流动相：甲醇-水溶液(梯度洗脱：0-5min，3％-8％甲醇；5-9min， 8％-48％甲醇；9-23min，48％-62％；23-25min，62％-95％)；25-28min，95％甲醇；

进样量为10μL，检测波长302nm，流速为1.0mL/min，流速为1.0mL/min，柱温40℃；

b.葡糖硫苷酶溶液配制

精密称取1mg葡糖硫苷酶，置于10mL容量瓶内，加蒸馏水溶解，定容，配制成每毫升含0.33UN的酶活力溶液；

c.标准曲线的绘制

精确称取BITC标准品250mg，用甲醇定容至25mL容量瓶内，配制成10mg/mL的标准品溶液；分别移取20μL、50μL、100μL、150μL、200μL，分别用甲醇定容至10mL容量瓶内，制成浓度为0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL的标准品溶液，用以制作标准曲线；在a项下色谱条件，分别进样10μL，以对照品质量浓度X(g/L)为横坐标，对照品峰面积Y为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，所得回归方程Y＝4886.3X+6.4890(R2＝0.9994，n＝5)，表明BITC在0～0.20mg/mL范围内有较好的线性关系；

d.供试品溶液