[发明专利]一种梵净山野生红托竹荪母种制作方法

权利要求书

1.一种梵净山野生红托竹荪母种制作方法，其特征在于：操作步骤如下：

⑴母种培养基的配制

称取干燥的土人参根、茎或叶共3～6克，大米50克，使用粉碎机混合粉碎（粉碎程度的标准是在加热配制培养基时，土人参和大米混合粉末能形成均匀的悬浮混合液），得到土人参和大米混合粉末，加入800毫升蒸馏水中，再加入琼脂20克、葡萄糖20克，用微波炉煮沸至琼脂完全溶解，定容至1000毫升，再分装到试管，每支试管分装1/4～1/3试管高度的混合液体，盖上试管帽，每支试管的试管帽一端，包2层纸，完全包住试管帽，用绳子捆紧，防止试管帽一端的试管直接与空气接触，121℃高压蒸汽灭菌，制成土人参试管斜面培养基，作为母种培养基备用（大规模的母种培养基，可以按上述比例进行配制，制成土人参试管斜面培养基备用）；

⑵梵净山野生红托竹荪菌蛋处理

采集梵净山野生红托竹荪菌蛋，去掉菌蛋外的杂质，每个菌蛋立即用保鲜膜包裹密封，带回实验室备用；菌蛋用自来水冲洗1～2小时，再用75%酒精喷洒后，在超净工作台上，用75%酒精浸泡90秒，再用2%次氯酸钠消毒30分钟，最后用无菌水清洗8次，获得消毒后的菌蛋，备用；

⑶接种

切开消毒后的菌蛋，取出菌柄，将菌柄切成若干个0.5～1厘米边长的方块，每支试管接种1块方块，接种1块方块置于试管底部一端，约三分之一试管长度的土人参斜面培养基上，每个菌蛋可接种8～12支试管，盖上试管帽，每支试管的试管帽一端，包2层纸，完全包住试管帽，用绳子捆紧，防止试管帽一端的试管直接与空气接触，即得接种好的试管；

⑷恒温培养

上述接种好的试管，置于20℃的恒温培养箱避光培养，45天左右即得即可得到梵净山野生红托竹荪母种；这时，母种可以作为菌种保藏，也可以转接1次，每支试管（直径20mm×长200mm）的母种可以转接成12～18支试管的原种，待菌丝铺满试管三分之二时，再转接1次，每支试管（直径20mm×长200mm）的原种，同样可以转接成12～18支试管的扩繁原种，从菌蛋接种开始计算时间，约4个月，1个菌蛋即可得到梵净山野生红托竹荪原种1152～3888支试管的原种。