[发明专利]聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统及制备方法

权利要求书

1.一种聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统，包括磷酸钙及交联透明质酸，其特征在于，磷酸钙包裹基因形成内核，巯基化透明质酸包覆于磷酸钙内核表面，透明质酸上面接枝的巯基至少部分氧化形成二硫键，从而形成交联透明质酸外壳包覆于内核表面，使磷酸钙纳米粒粒径变小、稳定性提高，其中所述透明质酸的分子量为30-70万，巯基取代度为30-60%，该纳米粒子的粒径为100~200nm。

2.一种制备聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统的方法，包括以下步骤：

1）制备试剂A：CaCl₂、缓冲盐溶液、基因；

2）制备试剂B：一定浓度的巯基化的透明质酸（HA-SH），磷酸氢二钠、氯化钠、缓冲盐水溶液；

3）将试剂A与试剂B混合；

4）所得制剂静置一段时间，

其特征在于，

在所述试剂A中，缓冲盐溶液为缓冲盐为Hepes、Tris的一种或两种任意比例的组合；

在所述B试剂中，透明质酸的分子量为30-70万，巯基取代度为30-60%；缓冲盐为Hepes、Tris的一种或两种任意比例的组合。

3.如权利要求2所述的制备聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统的方法，其特征在于，试剂A中缓冲盐为Tris缓冲盐；试剂B中缓冲盐为Hepes缓冲盐。

4.如权利要求2和3中任一项所述的制备聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统的方法，其特征在于，在所述试剂A中的氯化钙的浓度为100~300mM，Tris缓冲盐浓度为10~30mM，pH为7.0~8.0；在所述试剂B中，巯基化透明质酸浓度为40~3000μg/ml，磷酸盐的浓度为100~300mM，NaCl浓度为100~300mM，Hepes缓冲盐的浓度为20~50mM，pH为7.0~8.0。

5.如权利要求4所述的制备聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统的方法，其特征在于，巯基化透明质酸浓度为600~2000μg/ml。

6.如权利要求2所述的制备聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统的方法，其特征在于，基因与CaCl₂溶液混合再与Tris缓冲液混合或基因与CaCl₂溶液和Tris缓冲液的混合溶液混合。

7.如权利要求6所述的制备聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统的方法，其特征在于，将CaCl₂溶液与基因溶液混合，再将Tris缓冲溶液滴加到上述混合溶液中。

8.如权利要求1所述的聚阴离子聚合物/磷酸钙纳米基因递送系统用于体外细胞的基因转染的用途，其中所述基因是DNA、siRNA、miRNA中的任一或多种。