[发明专利]一种磁性纳米颗粒生物探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种磁性纳米颗粒生物探针的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

步骤1）对粒径为100-200nm的磁性纳米颗粒进行表面氨基化处理，得到表面氨基化的磁性纳米颗粒；再对所述表面氨基化的磁性纳米颗粒进行羧基化处理，得到表面羧基化的磁性纳米颗粒；

步骤2）在缓冲液中将所述表面羧基化的磁性纳米颗粒、碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺混合反应，反应后洗涤，得到反应物A；

步骤3）在偶联缓冲液中将所述反应物A和HBV preS1的抗体混合反应，得到反应物B；

步骤4）将所述反应物B与含氨基的化合物的溶液混合反应，反应后洗涤，即制得磁性纳米颗粒生物探针。

2.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒生物探针的制备方法，其特征在于,

步骤1）中，所述磁性纳米颗粒的比饱和磁化强度在25-45emu/g；

和/或，步骤1）中，所述磁性纳米颗粒为具有核壳结构的磁性粒子/氧化硅复合材料，所述磁性纳米颗粒的内核为磁性粒子，所述磁性纳米颗粒的壳层为氧化硅；

和/或，步骤1）中，所述表面羧基化的磁性纳米颗粒中的羧基含量为0.35mmol/g以上；

和/或，步骤1）中，所述磁性纳米颗粒采用以下方法制得：

用溶剂热法制备磁性粒子：

    将无机铁盐、尿素、稳定剂和乙二醇混合，于180-220℃下反应8-24小时，洗涤，即得磁性粒子；所述的稳定剂为柠檬酸钠或者聚丙烯酸；

氧化硅包被磁性粒子：

    将上述制得的磁性粒子和0.8-1.2mol/L的强酸溶液混合，超声10-40分钟，在磁分离的辅助下用去离子水洗涤5-7次，得到活化后的磁性粒子；将所述活化后的磁性粒子和醇水混合液混合，在搅拌状态下加入碱和正硅酸烷基酯，所加入的碱使得混合后体系的pH值在8.0-10.5，反应8-24小时，在磁分离的辅助下用醇洗涤3-5次，即制得所述磁性纳米颗粒；其中，所述正硅酸烷基酯的用量为20-500μL/100mg所述磁性粒子，所述醇水混合液中的醇水比例为60:40-90:10。

3.根据权利要求2所述的磁性纳米颗粒生物探针的制备方法，其特征在于,

步骤1）中，所述的磁性粒子为铁氧化物；所述磁性粒子/氧化硅复合材料的壳层的厚度为5-50nm；

和/或，步骤1）中，所述表面羧基化的磁性纳米颗粒中的羧基含量为0.35-5.0mmol/g。

4.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒生物探针的制备方法，其特征在于,

步骤1）中，所述的表面氨基化处理采用硅烷偶联剂进行；

和/或，步骤1）中，所述表面羧基化处理采用酸酐进行；

和/或，步骤2）中，在所述的混合前还用缓冲液洗涤2-3次，再用缓冲液使所述表面羧基化的磁性纳米颗粒重悬；

和/或，步骤2）中，所述缓冲液的pH值为4.5-5.5；

和/或，步骤2）中，所述的缓冲液为含0.05-1.5v%吐温的2-（N-吗啉代）乙磺酸溶液；

和/或，步骤2）中，所述碳化二亚胺的用量为1.2-1.4μmol/1mg所述表面羧基化的磁性纳米颗粒，所述N-羟基琥珀酰亚胺的用量为1.2-1.4μmol/1mg所述表面羧基化的磁性纳米颗粒；

和/或，步骤2）中，所述反应的时间为30-60min；

和/或，步骤2）中，在所述反应后，所述的洗涤按下述操作进行：用含0.05-1.5v%的吐温-20的2-（N-吗啉代）乙磺酸溶液洗涤2次后，再用硼酸盐吐温溶液洗涤2次；

和/或，步骤3）中，所述的抗体是单抗和/或多抗；

和/或，步骤3）中，所述偶联缓冲液的pH值为8.8-9.2；

和/或，步骤3）中，所述的偶联缓冲液为硼酸盐吐温溶液；

和/或，步骤3）中，所述反应的时间为2-4小时；

和/或，步骤4）中，所述含氨基的化合物的溶液为牛血清白蛋白溶液、Tris缓冲液、甘氨酸溶液和多肽溶液中的一种或多种；

和/或，步骤4）中，所述反应的时间为30-60min；

和/或，步骤4）中，所述的洗涤按下述操作进行：用硼酸盐吐温溶液洗涤2-4次。