[发明专利]一种磁性纳米颗粒生物探针及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术与纳米材料技术领域，具体涉及一种用于检测HBV preS1抗原的磁性纳米颗粒生物探针、磁性免疫层析试纸条及其制备方法和使用方法。

背景技术

乙型肝炎（HBV）是我国的高发病，我国人群中感染率达60%，且呈逐年上升趋势，HBV表面抗原携带者有1.3亿以上,10%以上转为慢性肝炎,部分演变为肝硬化 ,进而引发肝癌。因此，对乙肝病毒在体内是否有复制的准确判断及抗病毒治疗后的准确监测就显得特别重要。临床上应用乙肝五项血清学指标及其模式的动态变化，监测、监控HBV感染者的病情,判断感染者的传染性和评价抗病毒药物的治疗效果。20世纪80年代末期,随着PCR技术的出现及成熟, HBV-DNA定量已经成为乙型肝炎诊断的金标准，但是PCR技术由于其实验要求的高标准及高成本,使其推广利用大大受限。

国内外近年来的研究表明,HBV前S1(preS1)抗原是病毒存在和复制的又一新标志，Pre-S1Ag出现在急性HBV感染的最早期，并与HBV核心抗原（HBeAg）及HBV DNA显著相关。前S1抗原与HBV-DNA检出率两者符合，前S1抗原仅在HBV-DNA阳性血清中检出。前S1蛋白随HBeAg消失而消失，且与阴转时间呈正相关，这样，前S1抗原可作为病毒清除与病毒转阴的指标。前S1抗原阳性的乙型肝炎患者传播乙型肝炎病毒比前S1抗原阴性和无症状HbsAg携带者的危险性更大，因而说明前S1抗原可反映乙型肝炎病毒复制和传染性的指标。如果前S1抗原持续阳性，指示AHB向慢性转变。比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、和HBsAg阳性的患者血清中前S1蛋白，前S1抗原阴转愈早，AHB患者的疗程愈短，预后也愈好。说明前S1抗原及其抗体的检测是急性乙型肝炎的临床诊断，疗效观察和判数据预后的良好指标。

一直以来，在中国检测HBV采用的是传统的ELISA检测，由于ELISA检测成本低，收费低，病人负担相对较小。所以对于采用化学发光和电化学发光检测来说很难全面的推广到各地区的医院，虽然化学发光和电化学发光检测相对于传统的ELISA方法检测HBV具有明显检测灵敏度和检测线性的优势，对于相同类的竞争化学发光和时间分辨荧光来说，也具有设备更稳定，结果更稳定的优势，但是操作步骤和检测时间与传统ELISA方法相比并没有简化太多，检测成本昂贵，对临床检验医师的技术要求也比较高，限制了其在临床的推广使用。

磁性纳米探针法免疫层析检测技术是借鉴目前已经成熟的免疫胶体金层析技术的基本原理，以磁性纳米材料代替胶体金颗粒利用抗体、抗原在试纸条上的夹心反应，实现磁性纳米探针标记乙肝前S1抗原的检测技术，既克服了目前免疫胶体金层析技术定量困难、检测灵敏度低的不足，又具有快速、灵敏、高特异性，并可以实现定量检测，是一种适合于现场检测的快速检测技术，具有很好的发展趋势和应用前景。

磁性纳米材料是以具有超顺磁性的铁氧化物（多为四氧化三铁）为内核，以氧化硅为壳层，当该铁氧化物颗粒体积减小到某一数值时，热扰动能将与总的磁晶各向异性能相当，这样，颗粒内的磁矩方向就可能随着时间的推移，整体保持平行地在一个易磁化方向和另一个易磁化方向之间反复变化。从单畴颗粒集合体看，就具有超顺磁性。在单畴颗粒集合体出现超顺磁性的温度范围内，分别在不同的温度下测量其磁化曲线，这些磁化曲线必定是重合在一起的，且不会出现磁滞，即集合体的剩磁和矫顽力都为零。这种超顺磁性也是磁性纳米材料的生物医学应用的基本保障。

由于磁性纳米探针法检测HBV preS1抗原可以做到病毒定量检测，因此临床医生可以根据HBV病毒的量的变化分析病人的病情发展，从而更好的知道临床医生的合理用药，节省病人对乙肝治疗的费用，尤其是对慢性乙肝更具有长期的监测作用。当然因其高的灵敏度，使得磁性纳米探针法检测HBV preS1抗原，可以提高乙肝的检测率，使检测的窗口期提前，防止出现 ELISA法的假阴性而漏检，所以磁性纳米探针法检测HBV preS1抗原还可以广泛用于体检的检测。

发明内容

为了克服现有技术中“两对半”试剂不能很好的反映乙肝病毒的存在状况，不能定量检测HBV，而HBV-DNA定量PCR检测实验成本高、耗时长的缺陷，本发明提供一种用于检测HBV preS1抗原的磁性纳米颗粒生物探针、磁性免疫层析试纸条及其制备方法和使用方法，其磁性纳米颗粒生物探针具有特异性强，信号灵敏且稳定性好的特点，其的磁性免疫层析试纸条可以实现对人外周血清中HBV preS1抗原的快速定性和定量检测。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：