[发明专利]一种安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法

权利要求书

1.一种安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)对照动物模型的选择：选择安徽地方猪种圩猪、安庆六白猪与外来猪种大白猪为研究肉质品种差异的对照动物模型；

(2)样品采集：猪屠宰后，取背最长肌、心脏及肝脏组织；

(3)常规肉质指标测定：白度色度计测定眼肌肉色、pH计检测背最长肌屠宰存储1小时及24小时后pH值、宰后即用嫩度仪检测背最长肌剪切力；

(4)采用色谱法测定背最长肌样品中IMP含量；

(5)采用索氏抽提法测定背最长肌样品中IMF含量；

(6)采用RT-PCR的方法比较IMP和IMF形成过程中关键基因ADSL、GARS-AIRS-GART、和DGAT1、DECR1mRNA在猪肝脏、心脏和背最长肌组织中的表达水平，并进行数据的统计分析，研究此四种基因在不同猪种和组织中的表达规律及其与各肉质指标的相关性。

2.根据权利要求1所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其特征在于：步骤(1)中所述圩猪为21头10月龄圩猪、所述安庆六白猪为13头10月龄安庆六白猪，所述长白猪为6头6月龄长白猪。

3.根据权利要求2所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其特征在于：步骤(2)中所述样品采集为：21头10月龄圩猪、13头10月龄安庆六白猪及6头6月龄长白猪屠宰后，①取背最长肌组织若干，于4℃保存，用于肉质常规指标及IMF、IMP含量测定；②取背最长肌、肝脏和心脏组织各100g，液氮冷冻，后转移至-80℃冰箱保存，用于基因表达检测。

4.根据权利要求3所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其特征在于：步骤(3)具体包括如下步骤：

肉色的测定：屠宰后立即测量，采用白度色度计测定眼肌肉色，读取L*值、a*值和b*值，其中L*值表示亮度，取值0-100，值越大，亮度越大，L*大于53为灰白肉即异质肉；a*值是度量肌肉从红色到绿色的变化，a值越大肉质越好；b*值是度量肌肉从黄色到蓝色的变化，b值越小肉质越好；根据所测的L*、a*和b*值判断肉色的差别；所述测定眼肌肉色为测定背最长肌在胸腰椎结合处横截切面的肉色；

pH值的测定：屠宰后1小时测量，将pH电极直接插入所取背最长肌样品的中部，深度不小于1cm，将电极头部完全包埋在肉样中，待数值稳定后，读取pH值，精确到0.01；将肉样置于0-4℃冰箱中保存24h后，按照相同方法测pH值，所读取的数值即为pH_24h；

嫩度的测定：屠宰后立即测量，用剪切力表示，在肌肉中心插入温度计，放在保鲜袋中，然后放入温度为72℃的水中蒸煮，当肉中心温度达到70℃时取出，冷却至室温后，将肉样按与肌纤维呈垂直的方向切取宽度为1.5cm的肉块，再用直径为1.27cm圆形的取样器，顺肌纤维方向钻切肉样块，置于嫩度仪中测其剪切力，每个样品做10个重复，记录剪切力值，计算算术平均数，单位用牛顿(N)表示。

5.根据权利要求4所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其特征在于：步骤(4)具体包括如下步骤：

样品前处理：

于屠宰后1.5h内迅速采集背最长肌组织作为猪肉样品，当冷藏时间达到24h时，取出猪肉样品制备肌苷酸测定样，使用绞肉机绞碎所述猪肉样品，准确称取5g，精确到0.0001，置于50mL塑料离心管中，加入20mL 6％高氯酸，用高速组织匀浆机匀浆；匀浆液以8000r/min离心15min，过滤到100mL的三角瓶中，将沉淀物用15mL 6％高氯酸再次匀浆，离心，合并两次上清液，用5.0mol/L和0.5mol/L NaOH调pH值至6.5，转移至100mL容量瓶中，定容摇匀，测定前用0.45μm滤膜过滤后用于HPLC分析；

色谱条件：

色谱柱：Agilent 1100dC18柱，5μm，Φ4.6mm×150mm；流动相：50mmol/L pH6.5甲酸铵缓冲溶液，其中含有5％甲醇；流速：1mL/min；柱温：25℃；进样量：5μL；紫外检测波长：254nm；运行时间：标准工作液运行4min，样品提取液运行11min。