[发明专利]一种安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法。

背景技术

随生活水平提高、营养观念的转变，人们对猪肉品质的要求越来越高，目前提高猪肉品质成为生猪生产中的首要任务。过去的几十年间，生猪产业迎合市场需求，致力于瘦肉型商品猪的高效生产，使商品猪生长周期越来越短，瘦肉产量也不断增加；但随之而来的是猪肉肉质变劣，猪肉口感下降，比如：粗糙、缺乏肉的风味和香味。这是长期以来片面追求生长速度快和瘦肉率高所致，而在猪肉品质改善、提高以及肉质性状遗传基础等方面缺少关注，这一问题已受到各国学者的广泛关注。

我国地方猪种具有优良的肉质特性，利用地方猪种培育和生产优质风味猪肉是我国近年来生猪生产发展的一个主要方向。在国内的一些大中城市，优质风味猪肉越来越多地受到广大消费者的欢迎。在大中城市超市的货架上，土猪肉即便价格上调20％以上，仍供不应求。因此对我国地方猪种肉质特性进行更深入的研究，可对我国地方猪种肉质特性有更深刻、更全面的认识。

现有相关研究已明确，猪肉质性状数属于数量性状，主要由多种基因控制，随着分子生物学技术的发展，可以筛选出控制肉质性状的候选基因，对肉质性状相关候选基因的研究已成为目前研究热点。相关研究成果可为地方猪种质资源特性和肉质性状研究提供分子生物学参考。也可为我国地方猪种合理开发利用及优质肉猪配套系和新品种培育提供理论依据和技术支撑。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种效果理想、成本低、操作简便的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法。

一种安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，包括如下步骤：

(1)对照动物模型的选择：选择安徽地方猪种圩猪、安庆六白猪与外来猪种大白猪为研究肉质品种差异的对照动物模型；

(2)样品采集：猪屠宰后，取背最长肌、心脏及肝脏组织；

(3)常规肉质指标测定：白度色度计测定眼肌肉色、pH计检测背最长肌屠宰存储1小时及24小时后pH值、宰后即用嫩度仪检测背最长肌剪切力；

(4)采用色谱法测定背最长肌样品中IMP含量；

(5)采用索氏抽提法测定背最长肌样品中IMF含量；

(6)采用RT-PCR的方法比较IMP和IMF形成过程中关键基因ADSL、GARS-AIRS-GART和DGAT1、DECR1 mRNA在猪肝脏、心脏和背最长肌组织中的表达水平，并进行数据的统计分析，研究此四种基因在不同猪种和组织中的表达规律及其与各肉质指标的相关性。

本发明所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其中，步骤(1)中所述圩猪为21头10月龄圩猪、所述安庆六白猪为13头10月龄安庆六白猪，所述长白猪为6头6月龄长白猪。

本发明所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其中，步骤(2)中所述样品采集为：21头10月龄圩猪、13头10月龄安庆六白猪及6头6月龄长白猪屠宰后，①取背最长肌组织若干，于4℃保存，用于肉质常规指标及IMF、IMP含量测定；②取背最长肌、肝脏和心脏组织各100g，液氮冷冻，后转移至-80℃冰箱保存，用于基因表达检测。

本发明所述的安徽地方猪种肉质性状候选基因的筛选方法，其中，步骤(3)具体包括如下步骤：

肉色的测定：屠宰后立即测量，采用白度色度计测定眼肌肉色，读取L*值、a*值和b*值，其中L*值表示亮度，取值0-100，值越大，亮度越大，L*大于53为灰白肉即异质肉；a*值是度量肌肉从红色到绿色的变化，a值越大肉质越好；b*值是度量肌肉从黄色到蓝色的变化，b值越小肉质越好；根据所测的L*、a*和b*值判断肉色的差别；所述测定眼肌肉色为测定背最长肌在胸腰椎结合处横截切面的肉色；

pH值的测定：屠宰后1小时测量，将pH电极直接插入所取背最长肌样品的中部，深度不小于1cm，将电极头部完全包埋在肉样中，待数值稳定后，读取pH值，精确到0.01；将肉样置于0-4℃冰箱中保存24h后，按照相同方法测pH值，所读取的数值即为pH_24h；

嫩度的测定：屠宰后立即测量，用剪切力表示，在肌肉中心插入温度计，放在保鲜袋中，然后放入温度为72℃的水中蒸煮，当肉中心温度达到70℃时取出，冷却至室温后，将肉样按与肌纤维呈垂直的方向切取宽度为1.5cm的肉块，再用直径为1.27cm圆形的取样器，顺肌纤维方向钻切肉样块，置于嫩度仪中测其剪切力，每个样品做10个重复，记录剪切力值，计算算术平均数，单位用牛顿(N)表示。