[发明专利]利用鸡肉加工过程中的废弃器官-鸡头提取乙酰胆碱酯酶的方法

权利要求书

1.利用鸡肉加工过程中的废弃器官‐鸡头提取乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)乙酰胆碱酯酶的制备：

(1.1)将洗净烘干的表面皿称重，将新鲜的纵向斩开的鸡头用生理盐水冲洗干净，用镊子将鸡脑取出至于表面皿中，去除非脑组织后再次称重；

(1.2)将鸡脑与含TritonX-100的磷酸盐缓冲液混合，得到混合液；

(1.3)将步骤(1.2)所得混合液用匀浆机匀浆1～5min后，静置10～60min，得到匀浆液；

(1.4)将匀浆液以3000～10000r/min，0～4℃离心10～30min，取其上清液，即得乙酰胆碱酯酶粗提液；

(1.5)将步骤(1.4)所得的乙酰胆碱酯酶粗提液的上清液置于表面皿中，进行真空冷冻干燥，收集后即得乙酰胆碱酯酶制品；

(2)乙酰胆碱酯酶酶活的测定：

(2.1)取0.02～1.0mg的乙酰胆碱酯酶制品，用蒸馏水溶解后，得到酶液，在10mL的比色管内，加入1～5mL磷酸盐缓冲液，再加入0.01～0.1mL酶液混匀，于25～60℃恒温水浴锅中保温5～60min；

(2.2)向加入0.1～1.0mL碘化硫代乙酰胆碱溶液和0.1～1.0mL DTNB溶液后混匀；

(2.3)于400～500nm波长范围内用比色皿比色，记录吸光度，根据吸光度变化值来计算酶活和比活力,比活力酶活力

式中：A—3min时吸光度的变化值；

V—反应体系总体积(L)；

ε—消光系数，1.36×10⁴L/(mol×cm)；

d—比色皿光程，1cm；

T—反应时间，3min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用于提取乙酰胆碱酯酶的原料采用废弃器官鸡脑。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的含TritonX-100的磷酸盐缓冲液中TritonX-100浓度为0.1％～3.0％(v/v)，所述比例为1：2～1：10(g/mL)；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.02～0.2M，pH 7.0～9.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的进行真空冷冻干燥的液体厚度为0.1～2.0cm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2.1)中所述的磷酸盐缓冲液pH 6.0～10.0，浓度为0.1M，所用恒温水浴锅温度在25～60℃，保温时间为5～60min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的碘化硫代乙酰胆碱溶液浓度为5～30mg/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述波长范围在400～500nm。