[发明专利]马红球菌致病基因VapA重组蛋白的应用

权利要求书

1.马红球菌致病基因VapA重组蛋白在制备治疗由马红球菌引起的疾病的制剂中的应用，其特征在于，所述马红球菌致病基因VapA重组蛋白为带MBP标签的MBP-VapA，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.马红球菌致病基因VapA重组蛋白在制备检测由马红球菌引起的疾病的制剂中的应用，其特征在于，所述马红球菌致病基因VapA重组蛋白为带MBP标签的MBP-VapA，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.一种制备治疗马红球菌病的免疫血清的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. MBP-VapA重组蛋白的制备：

S11. 重组质粒PMAL-VapA的构建：设计SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所述引物扩增VapA基因，将VapA基因与pZeroBack/blunt载体相连构建质粒pZeroBack-VapA；最后将PMAL-c5x和测序正确的pZeroBack-VapA进行双酶切后构建表达载体PMAL-VapA；

S12. 将PMAL-VapA 转化入BL21菌中，测序鉴定为阳性之后，将菌液接种于培养基中，培养至OD₆₀₀值为0.5～0.7，加入IPTG诱导后，离心重悬菌体，破碎菌体，收集上清，获得可溶性VapA蛋白；

S2. 将纯化后的MBP-VapA重组蛋白与免疫佐剂混合后免疫动物，获得免疫血清。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，是将原核表达菌在培养至OD₆₀₀值为0.5～0.7后，加入IPTG进行诱导。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，IPTG诱导的浓度为0.3～0.7mM，诱导时间为8～12h。