[发明专利]一种检测马红球菌病的试剂盒有效
| 申请号： | 201510273815.1 | 申请日： | 2015-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN104865380A | 公开（公告）日： | 2015-08-26 |
| 发明（设计）人： | 孙凌霜;远立国;李守军 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/531 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 球菌 试剂盒 | ||
1.一种检测马红球菌病的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括作为免疫原的马红球菌致病基因VapA重组蛋白MBP-VapA，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2. 一种检测马红球菌病的ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 免疫原的制备如下：扩增VapA基因，并克隆到PMAL-C5x载体上，构建表达载体PMAL-VapA，将PMAL-VapA转化至原核表达菌，通过IPTG在20℃下诱导、纯化后获得重组蛋白MBP-VapA；
S2. 分别配制酶标抗体羊抗马IgG Fab'2-HRP、阴性对照胎马血清、阳性对照马红球菌灭活疫苗免疫的成年马血清和封闭液PVA获得ELISA试剂盒。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白MBP-VapA的包被浓度为0.125ug/mL，阴性对照和阳性对照血清稀释度为1：400，羊抗马 IgG Fab'2-HRP稀释度为1：20000，封闭液为0.5%PVA。
4. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括适于MBP-VapA与抗马红球菌致病基因VapA抗体发生抗原抗体反应的检测试剂。
5. 根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包被有MBP-VapA的固相载体、酶标抗体。
6. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括封闭液、洗涤液、显色液、终止液、阳性和阴性对照。
7. 根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为胎马血清，阳性对照为马红球菌灭活疫苗免疫的成年马血清。
8. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为羊抗马IgG Fab'2-HRP。
9. 根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述MBP-VapA的包被浓度为0.125ug/mL，阴性对照和阳性对照血清稀释度为1：400，羊抗马 IgG Fab'2-HRP稀释度为1：20000，封闭液为0.5%PVA。
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