[发明专利]一种应用于大肠杆菌的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种应用于大肠杆菌的培养基，其特征在于，由下列物质组成：蛋白胨15.0g、酵母膏粉3.0g、氯化钠5.0g、葡萄糖0.2g、十二烷基硫酸钠0.1g、琼脂12.0g、混合显色底物6.77g、蒸馏水100ml、自然pH 2％去氧胆酸钠溶液4ml、链霉素溶液0.66ml、孟加拉红溶液0.33ml、KH₂PO₄·3H₂O 0.1g、MgSO₄·7H₂O 0.05g。

2.根据权利要求1所述的一种应用于大肠杆菌的培养基，其特征在于：所述链霉素溶液浓度为10000u/ml。

3. 根据权利要求2所述的一种应用于大肠杆菌的培养基，其特征在于：所述培养基pH为7.2～7.4。

4.一种大肠杆菌种子液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

（1）称量，按培养基的配方比例依次准确称取蛋白胨、酵母膏粉、氯化钠、葡萄糖、十二烷基硫酸钠、混合显色底物、自然pH 2％去氧胆酸钠溶液、链霉素溶液、孟加拉红溶液、KH₂PO₄·3H2O、MgSO₄·7H₂O 放入烧杯中；

（2）溶化，在上述烧杯中加入适量蒸馏水、搅拌，加热溶解，按配方比例称取琼脂，加热溶化；

（3）调节PH；

（4）分装 将培养基分装入三个试管和三角烧瓶中，试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2，分装完后，加塞；

（5）包扎 加塞后，用麻绳将试管捆绑，在棉塞外包一层牛皮纸，作好记录；

 （6）灭菌 将上述培养基以0.1MPa,121℃，25min高压蒸汽灭菌；

 （7）倒平板 取已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒置三个平板培养基，冷却；

（8）搁置斜面，取灭菌的试管培养基冷却至50℃，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置斜面长度不超过试管总长的一半；

 （9）取制备的大肠杆菌种子，用接种环在已制备的的斜面上接种大肠杆菌；

（10）所述步骤（9）接种好的斜面放入37℃的恒温箱培养箱子中培养24小时；

（11）在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌斜面，用无菌生理盐水将菌种进行冲洗，再用无菌生理盐水将其按梯度进行稀释，分别吸取溶液土布平板，然后再37℃培养箱中过夜；

 （12）选择生长状态好、特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的大肠杆菌培养基中37℃170r/min恒温培养18小时作大肠杆菌种子培养液。

5.大肠杆菌的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）一级种子的制备，大肠杆菌菌种分别接种于含0.1%微量盐溶液的培养基中，37℃条件下培养24小时，划线接种琼脂平板上培养，再接种马丁琼脂斜面，37℃条件下培养20～24小时，作为一级种子；

（2）二级种子的制备，将大肠杆菌菌株的一级种子液接种到培养基中，37℃条件下培养24小时，经纯粹检验合格后，作为二级种子，置3～7℃条件下保存；

（3）将大肠杆菌菌株的二级种子液接种到含0.1%微量盐溶液的培养基，二级种子液接种量为培养基体积总量的2～3%，菌株种子在37℃条件下于微生物摇床内培养11～13小时。

6.根据权利要求5所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：所述摇床转速为160～180转/分钟。

7.根据权利要求6所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：菌株种子在37℃条件下于微生物摇床内培养12小时。

8.根据权利要求7所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：所述摇床转速为170转/分钟。