[发明专利]从三种高山鼠尾草植物中制备隐丹参酮化学对照品的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种隐丹参酮（Cryptotanshinone）化学对照品的制备方法，尤其涉及从三种高山鼠尾草植物中制备隐丹参酮化学对照品的方法。

背景技术

鼠尾草属（Salvia L.）是唇形科最大属，青藏高原上主要分布三种鼠尾草种，粘毛鼠尾草（Salvia roborowskii）、甘西鼠尾草（Salvia przewalskii Maxim.）及康定鼠尾草（Salvia prattii）。现代研究表明鼠尾草植物中的化学成分主要包括酚酸类及萜类。目前，三种高山鼠尾草属植物甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草及康定鼠尾草药材并未有质控指标成分，隐丹参酮是这三种鼠尾草属植物中含量较高的丹参酮类化合物，由于丹参酮类化合物极性相近、加之化合物结构差异及其细微，从这三种鼠尾草药材中获取高纯度隐丹参酮对照品较为困难。为了加快高山鼠尾草属植物的质量评价、生产销售及相关新药的研发步伐，发展高纯度隐丹参酮的高效制备方法，尤其规模化制备技术显得尤为重要。

目前，从高山鼠尾草属植物制备丹参酮类化合物的文献未见报道，中国专利（CN101265286B）报道采用二氧化碳提取、过滤、膜浓缩、结晶等5~8步生产出纯度60%以上的隐丹参酮，过程较繁琐且损失量较大，而从甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草及康定鼠尾草中快速获取规模化隐丹参酮的制备研究未见文献报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易规模化的从三种高山鼠尾草植物中制备隐丹参酮化学对照品的方法。

为解决上述问题，本发明所述的从三种高山鼠尾草植物中制备隐丹参酮化学对照品的方法，包括以下步骤：

⑴微孔树脂除杂：

按常规方法制得的棕红色浸膏状的粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一种醇提物用其质量10~20倍的体积分数30~50%的乙醇溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，先以2~5倍柱体积的水溶液洗脱除去杂质，然后用2~5倍柱体积、体积分数30~90%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集70%~90%甲醇水洗脱物，该甲醇水洗脱物经减压干燥得丹参酮类组分粗品；所述粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一种醇提物与所述微孔树脂比例为1 g：10 mL；

⑵硅胶柱富集：

将所述丹参酮类组分粗品经硅胶柱色谱分离后，用3~5倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份500 mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.75~0.85的馏分；所述Rf值为0.75~0.85的馏分经减压干燥即得红色粉末状的隐丹参酮粗品；

⑶反相液相制备色谱精制：

所述隐丹参酮粗品用其质量5~10倍的体积分数为80%~100%的甲醇溶液溶解，然后配制样品浓度为100.0~200.0 mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液B，该滤液B经反相液相制备色谱分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中主要的色谱峰馏分，该色谱峰馏分经减压干燥即得纯度大于98%的红色粉末状的对照品。

所述步骤⑴和所述步骤⑵及所述步骤⑶中的减压干燥的条件均是指真空度为0.06~0.09 MPa，温度为50~70 ℃。

所述步骤⑵中硅胶柱的尺寸为30 mm~60 mm×60 mm ~100 mm。

所述步骤⑵中氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按9：1：0.1~8：2：0.2体积比混合均匀而得。

所述步骤⑶中反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250 mm、直径50 mm，反相液相制备柱固定相为10 μm Megress C18，流动相为体积分数65%~75%的甲醇-水溶液，进样体积为10~15mL，流速为80 mL/min。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明工艺简单、回收率高。

第一步采用微孔树脂除杂，可获取纯度约20%的隐丹参酮二萜醌类组分粗品，同时，微孔树脂具有良好的脱色效果。第二步采用硅胶柱富集，可富集到纯度为80%的隐丹参酮粗品；第三步采用反相液相制备色谱制备，可获取高纯度对照品，且收率较高（>85%）。

2、本发明采用的技术手段非常适宜规模化生产。