[发明专利]AFP抗体修饰PLGA荷载DCN的纳米粒靶向抗肿瘤药物

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种靶向抗肿瘤药物，特别是涉及一种针对原发性肝细胞癌的靶向治疗药物。

背景技术

原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见且死亡率最高的恶性肿瘤之一。我国HCC发病率位居世界首列，且仍逐年增长，是严重威胁我国人民健康的重大疾病。HCC因恶性度高、转移早、复发率高等特点而严重制约其疗效，加上传统治疗方法对机体免疫功能带来的极大负面影响，使肿瘤进展加速、加剧，预后极差。关注并大力开展HCC治疗研究，对我国尤具十分重要和现实的社会及医学意义。随着分子生物学和免疫学的不断发展，对HCC发生、发展机制认识的不断深入，HCC的基因靶向治疗已成为肿瘤临床研究的热点。

传统基因载体系统分为病毒载体和非病毒载体两类，现有病毒载体存在免疫原性、致瘤性的缺陷；非病毒载体则存在着低传递效率的问题。同时，这些基因转染的方式都缺少细胞靶向性，并且载体携带的目的基因通过转染作用于肿瘤细胞后，往往会在短时间内被细胞内的酶消化破坏，作用时间短，生物利用度低。这些问题导致了传统基因治疗效果不佳，已经成为限制基因治疗进一步发展的瓶颈。

纳米基因载体是一种新型的基因载体系统，其以纳米颗粒为载体，将治疗基因包裹在纳米颗粒中或吸附在其表面，通过细胞内摄作用使纳米颗粒进入细胞并释放治疗基因，从而发挥基因治疗效能。聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)纳米颗粒是一种具有良好生物相容性及降解性的生物材料，已被美国FDA批准在人体内使用。PLGA纳米颗粒还具有核苷酸保护作用，通过对PLGA末端的活性羧基进行修饰，可以偶联靶细胞的配体或抗体，实现基因治疗的主动靶向性。

核心蛋白聚糖(decorin，DCN)是蛋白聚糖(proteoglycan，PG)家族的一个多效性分子，通过核心蛋白调控细胞周期及结合细胞因子等调节细胞增殖、分化与基质形成。近年大量资料表明：1) DCN是一种有效的肿瘤细胞生长与迁移抑制剂，可抑制多种不同组织来源的肿瘤细胞生长，并诱导其凋亡；2) 新近又发现DCN是Met(HGFR)的对抗性配体，在防止肿瘤侵袭、浸润和转移中发挥作用；3) DCN还能逆转肿瘤细胞抗药性。

DCN对多种靶点复杂的结合能力及引人注目的抗肿瘤作用，充分表明其在肿瘤治疗中的药用价值。国外学者采用腺病毒载体进行的DCN基因治疗研究显示，DCN有局部和远程特异性抗肿瘤作用。有个别报道，DCN含量减少可作为预测不良预后的指标。本课题组前期研究资料表明，无论DCN在体内过度表达，或作为重组蛋白或基因转染细胞，均可抑制多种不同组织来源的肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡，而且DCN能逆转肿瘤细胞抗药性。

发明内容

本发明的目的是针对传统基因载体存在的问题，提供一种基于新载体的AFP抗体修饰PLGA荷载DCN的纳米粒靶向抗肿瘤药物。

本发明所述的AFP抗体修饰PLGA荷载DCN的纳米粒靶向抗肿瘤药物基于DCN抑制肿瘤细胞增殖、转移、肿瘤血管生成及逆转肿瘤细胞抗药性等多重抗肿瘤作用，以DCN重组质粒作为核心治疗药物，选择高度特异性肝癌靶向性AFP单抗分子，采用以可降解性高分子生物材料制备的载药纳米粒聚乳酸/乙醇酸复合物(PLGA)荷载DCN抗癌基因质粒并偶联肝癌靶向性AFP单抗分子，构建AFP mAb-PLGA-rhDCN治疗性纳米粒子。

本发明所述AFP抗体修饰PLGA荷载DCN的纳米粒靶向抗肿瘤药物的制备方法是将PLGA分散于二氯甲烷溶液中作为油相，pIRES2-EGFP-DCN质粒分散于1wt% PVA水溶液中作为水相，将所述油相与水相混合制成初乳；将所述初乳滴入0.3wt% PVA水溶液中搅拌形成复乳；除去复乳中的二氯甲烷，离心收集纳米粒子，悬浮于pH7.4的PBS缓冲液中制成纳米粒分散体系；向纳米粒分散体系中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，反应得到活化的纳米粒，加入AFP单抗，反应得到AFP mAb-PLGA-rhDCN治疗性纳米粒子。

其中，加入的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为2∶1。

进一步地，本发明上述制备方法中，所述活化是在室温下搅拌反应40min；所述抗体偶联反应时间6h。