[发明专利]特异性抗烟曲霉菌感染的鸡卵黄抗体的制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫技术领域，特别涉及一种特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体的制备和应用。

背景技术

近年来随着抗菌药、免疫抑制剂、化疗药物和放疗的广泛应用，以及侵入性诊断和治疗技术的运用，机会致病性真菌感染率明显升高。曲霉菌属是一种重要的机会致病性真菌，烟曲霉是最常见的曲霉菌属。我国治疗真菌性疾病的常见药物包括那他霉素、两性霉素、新型三唑类药物等。根据世界卫生组织报告，在世界范围内的肺部感染和角膜感染中，真菌感染是感染性角膜病是主要的致盲原因之一，肺部的曲霉菌感染是真菌性肺部感染的主要致病菌之一。

常见的抗真菌药物在不同程度上存在水溶性不佳、全是毒副作用大、部分患者还会出现过敏反应等缺点。许多患者由于无法耐受而停止治疗，疗效往往不佳，患者病情时常反复，目前治疗真菌性疾病，并没有一种可以长期有效的控制真菌感染的药物。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提供一种特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体的制备和应用。

本发明所说的烟曲霉菌，该菌株保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏名称为：烟曲霉菌，保藏日期： 2011. 10.05，保藏编号为： NO.3.0772。

本发明的技术方案是：

一种特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体，所述的鸡卵黄抗体制备过程包括以下步骤：

步骤1：制备灭活烟曲霉菌丝悬液：接种烟曲霉菌于沙氏液体培养基中培养5天，取出烟曲霉菌丝团在研磨器中进行研磨，过滤孢子，最终将菌丝浓度调至2×10⁹CFU/ml；

步骤2：动物免疫：将菌丝浓度2×10⁹ CFU/mL的菌悬液与弗氏完全佐剂按1：1混合后充分乳化后，每只鸡注射1 mL/只，3周、5周、8周后换为弗氏不完全佐剂加强免疫3次；

步骤3：采用硫酸铵盐析法制备特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体蛋白：鸡蛋打碎去掉蛋清及蛋黄膜，将蛋黄液与超纯水1：8混匀，调pH至5.1，静置过夜；离心取上清液；后根据硫酸铵的溶解度和液体体积加入可最多析出IgY蛋白的量，静置2h；再离心去掉上清液蛋白析出，加入磷酸盐缓冲液溶解蛋白，再次加入硫酸铵静置2h；离心去掉上清液留蛋白，再次加入最少可溶解蛋白的磷酸盐缓冲液量复溶蛋白，装入透析袋透析48h；将透析完毕的液体冻成固体后放入冻干机中制作成冻干粉。4℃保存，6个月之后仍可保持较高的免疫活性，具有可长期保存的特性。

在以上方案的基础上，步骤2中所述的动物免疫注射的方法是于鸡的颈部、双翅及胸肌多处皮下散点注射，所用鸡为莱亨蛋鸡。

上述的鸡卵黄抗体在制备防治真菌性角膜炎的药物中应用。

可以制作成不同的药物剂型，如粉剂、药片、药膏、口腔喷雾、眼药水、眼药膏等。

本发明的有益效果是：

1）制作工艺不复杂、成本不高、易于保存，可大量生产；

2）本发明的特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体理化性质稳定，表现在较高的热稳定性和pH稳定性，低于60℃和pH3-9均可保持绝大多数的免疫亲和活性。

3）特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体与目前常用的抗真菌药物相比水溶性好，易于吸收，全身副作用小、过敏反应少、刺激性小、pH接近中性，是一种天然的生物抑菌剂。

附图说明

附图1为本发明具体实施例的特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体组的抑菌效果。

具体实施方式

    本发明的具体实施方式如下：

实施例1

特异性抗烟曲霉感染的鸡卵黄抗体的制备：

(1)制备灭活烟曲霉菌丝悬液：接种烟曲霉菌于沙氏液体培养基中培养5天，取出烟曲霉菌丝团在研磨器中进行研磨，过滤孢子，最终将菌丝浓度调至2×10⁹CFU/ml；

(2)将菌丝浓度2×10⁹ CFU/mL的菌悬液与福氏完全佐剂按1：1混合后充分乳化后，每只鸡注射(1 mL／只)，3周、5周、8周后换为福氏不完全佐剂加强免疫3次。