[发明专利]一种人基因组DNA34个基因座的复合扩增试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术常染色体和Y染色体分型和鉴定领域，涉及一种PCR扩增试剂盒，尤其涉及一种单管同时检测人基因组常染色体及Y染色体基因座的六色荧光标记复合扩增试剂盒以及该试剂盒在司法鉴定领域中的应用。

背景技术

短串联重复序列(short tandom repeat，STR)是人类基因组中由2-6个碱基作为核心单位串联重复形成的一类具有长度多态性的DNA序列，其核心单位的数目变化和重复次数不同构成了STR的遗传多态性。STR分布广，数目多，约占人类基因组的10％，所包含的信息量巨大，不同的序列可以产生数以亿计的基因型组合，而每一种组合在群体中出现的频率都非常低，具有极高的个体鉴定能力，所以常作为遗传标记而被用于DNA分析技术中法医个体识别、亲缘关系鉴定，同时也是DNA数据库建立的主流技术。同时，STR基因座的片段小，容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够符合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。由于这些优点STR基因座的分型研究与筛选早已在国内外人类学、医学遗传学和法医学及各相关领域中得到了广泛的应用。

人类Y染色体是小的近端着丝粒染色体，它由长臂和微小的短臂两部分组成。Y染色体，除拟常染色体区外，在减数分裂中不发生交换重组，呈单倍型独立向下传递，表现出父系遗传特征，同时序列的变异完全由累积的突变所致，并非重组引起。由于Y染色体的这些特点，Y染色体STR基因座(Y-STR)遗传标记作为一种工具已经被广泛应用于法医鉴定、亲权鉴定、失踪人员鉴定、人类迁移进化研究、历史和家系进化研究等多个领域。已发现的Y-STR基因座已有400多个，常用来检测的Y-STR基因座有9个欧洲最小单倍型基因座，包括DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS392、DYS393和2个美国DNA分析方法技术工作组(Scientific Working Group on DNA Analysis Methods,简称SWGDAM)推荐的基因座，包括DYS438、DYS439。

在法医鉴定与亲子鉴定领域，DNA分析主要依赖商业化的试剂盒进行。首先是国外的试剂盒发展历程，第一个Y-STR试剂盒是由ReliaGene Technologies在2001年研发的Y-PLEX^TM6，可复合扩增DYS19、DYS389II、DYS390、DYS391、DYS393、DYS385a/b；2002年ReliaGene Technologies又研发了可符合扩增DYS389I/II、DYS439、DYS438、DYS392的Y-PLEX^TM5，到2003年9月ReliaGene Technologies推出了整合了Y-PLEX^TM6和Y-PLEX^TM5所有基因座在内的Y-PLEX^TM12。同年10月，Promega公司推出了PowerPlex Y试剂盒，可复合扩增12个基因座，其中包括DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439。2004年秋，Applied Biosystems公司(简称AB公司)发布了包含17个Y-STR基因座的yfiler^TM试剂盒，其在PowerPlex Y的基础上增加了另外5个具有高度多态性的Y-STR基因座，包括DYS456、DYS458、DYS635、GATA-H4、DYS448。2012年秋，Promega公司推出了PowerPlex Y23试剂盒，在兼容了yfiler^TM试剂盒的17个位点外又额外增加了6个新位点包括DYS549、DYS481、DYS533、DYS570、DYS576、DYS643，进一步的提高了试剂盒的分辨率。目前PowePlex Y23试剂盒是目前市面上可复合扩增Y-STR最多的国外试剂盒。国内Y-STR试剂盒的发展相对较晚，目前主要有北京基点认知公司的Goldeneye 20Y试剂盒，可复合扩增20个Y-STR基因座，除包含yfiler^TM试剂盒的17个位点外新增加了DYS460、DYS447、DYS388。此外还有江苏中德美联公司推出的AGCU Y24STR荧光检测试剂盒，包含了24个Y-STR基因座包括DYS391、DYS389I/II、DYS439、DYS438、DYS449、DYS456、DYS458、DYS437、DYS635、DYS448、DYS527a/b、GATA H4、DYS447、DYS19、DYS392、DYS522、DYS393、DYS388、DYS390、DYS385a/b以及DYS444。