[发明专利]一种富含缬氨酸的高蛋白饲料生产方法

权利要求书

1.一种富含缬氨酸的高蛋白饲料生产方法，其特征在于：包括下述步骤：

第一步，液体发酵

将编号为CICC20887或CICC21764中的任意一株谷氨酸棒杆菌先进行种子培养和液体发酵；将编号为CICC 1314或CICC 1801中的任意一株产朊假丝酵母进行种子培养，然后接入到谷氨酸棒杆菌发酵液中混菌液体发酵，得到发酵液；将编号为CICC20764或CICC20767中的任意一株植物乳杆菌和编号为CICC23413或CICC20443中的任意一株纳豆芽胞杆菌分别进行种子培养和液体发酵，得到发酵液；

第二步，混合发酵醪液配制

将第一步得到的谷氨酸棒杆菌和产朊假丝酵母混菌发酵液10~60份与植物乳杆菌0~30份或/和纳豆芽胞杆菌0~30份之比例混合均匀，用Ca(OH)₂调节pH至中性，得到发酵醪液；

第三步，固态发酵

按重量比将100~150份豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上混合物5~10份糖蜜混合，得到固态发酵原料；将第二步配制的发酵醪液按固态发酵原料重量的50~100%的比例与固态发酵原料混合，进行有氧固态发酵，发酵条件：起始温度20~30℃，过程控制温度30℃~45℃，发酵时间48~72h，得到发酵料；

第四步， 烘干、粉碎和包装

将发酵料传送到干燥器上， 60~70℃条件下烘干到含水量≤12%，粉碎后称量包装，即可得到富含缬氨酸的高蛋白饲料；

其中第一步中谷氨酸棒杆菌与产阮假丝酵母混菌发酵液的制备方法为：将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的谷氨酸棒杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵种子培养基中培养，培养基组成：葡萄糖100-120g/L、(NH4)₂SO₄ 20-30g/L、玉米浆10-20g/L、KH₂PO₄ 1-1.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5 g/L、生物素5-8×10^-5 g/L、CaCO₃ 10-30 g/L；pH7.0，0.12 MPa下灭菌20 min；培养条件：罐压0.03-0.1 Mpa，搅拌转速 170-230 r/min，通风量1:0.25-0.5，培养温度30-32℃，发酵时间24-48 h；将YPD培养基上的产朊假丝酵母菌用无菌生理盐水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液中的产酸率达到2.8%以上时，接入产朊假丝酵母悬浮菌液，继续培养10h即可；

第一步中植物乳杆菌发酵液的制备方法为：使用固体MRS培养植物乳杆菌，将植物乳杆菌一级固体种子用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆20-35 g/L，七水合硫酸镁0.25-0.35 g/L，四水合硫酸锰0.01-0.015 g/L，七水合硫酸铁0.01-0.015 g/L，乙酸钠16-21 g/L，Tween-80 l mL/L；培养条件：罐压0.03-0.1 Mpa，静置培养，培养温度30-32℃，发酵18-22 h即可；

第一步中纳豆芽胞杆菌发酵液的制备方法为：将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的纳豆芽孢杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：豆粕粉1.0-3.0%，玉米粉1.0-3.0%，硫酸镁0.2-0.6%，硫酸锰0.02-0.06%，氯化钠0.5-1.0%；培养条件：罐压0.05-0.1 Mpa，搅拌转速170-230 r/min，通风量1:0. 5-1.2，培养温度32-35℃，发酵18-24 h即可。