[发明专利]一种中空纤维膜液相微萃取液相色谱联用的装置及其多糖组分在线定量分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种样品前处理的实验装置，尤其涉及一种中空纤维膜液相微萃取液相色谱联用的装置及其多糖组分在线定量分析方法。

背景技术

多糖是广泛存在于自然界的天然高分子化合物，由单糖通过糖苷键连接而成。多糖的单糖组成测定是控制多糖质量标准和提供多糖基本信息的最重要环节。单糖组成分是糖分析的一项基础而重要的内容。由于多数糖类物质不具备光学性质，因此对糖类物质采用色谱活电泳方法进行分离测定时，常用紫外或荧光试剂对糖类物质进行衍生，以改善其光学活性，提高检测灵敏度。例如，1苯基3甲基吡唑啉酮PMP用于糖类物质的衍生，产物具有强紫外吸收。柱前衍生法的反应条件温和，产物无立体异构体，但是具有操作繁琐，耗时较长等缺点。主要原因在于这类柱前衍生法的操作步骤包括1混合、2反应、3去除过多衍生化试剂等步骤，其中最后一个步骤是整个样品前处理过程的瓶颈，最为繁琐耗时，同时对分析方法的灵敏度影响最大。因此，如何快速、高效地去除过多衍生化试剂，同时保证分析方法的高灵敏，是一个亟待解决的难题。

随着现代仪器的快速发展，对样品的前处理要求也相应提高。中空纤维膜液相微萃取是一种新型的样品净化方法，由膜萃取和液液萃取技术相结合发展而来，以其特有的优势，区别于传统的液液萃取法，在样品分离提纯方面发挥了越来越重要的作用。其中，中空纤维膜壁为多孔结构，具有选择透过性，而膜壁上的萃取溶剂具有吸附选择性，可以起到较强的样品净化作用。最常用的中空纤维膜液相微萃取是液液两相萃取。一般而言，中空纤维膜外部为供给相，内部为接收相，供给相中的目标分析物经中空纤维膜膜壁微孔内的有机液膜被萃取至膜内腔的接收相中，分析物在两相中分配。萃取完成后，接收相通常可直接进行仪器分析。但是，目前所报道的中空纤维膜液相微萃取普遍采用接收相萃取富集样品中的目标物质，尚未见到用该类方法去除样品中的基体物质，净化样品后直接分析样品溶液的报道。而在糖类分析过程中正是需要解决如何去除衍生后样品中高浓度衍生试剂的问题，需要一种反相萃取装置来净化样品，去除基体干扰。

 本发明设计了一种在线中空纤维膜液相微萃取液相色谱联用的装置，将衍生后样品置于中空纤维膜的内腔中，外部采用有机溶剂萃取；样品净化完成后，将膜内腔中的样品打入液相色谱，分离测定糖类组分。该装置及方法主要用于糖类组分的分析，其他采用的在线中空纤维膜液相微萃取液相色谱联用装置取实验装置在装置构造、工作原理上均与本发明存在明显差异。经检索，未见与本发明类似的专利公开，以及以本发明类似实验装置开展的生物样品定量分析研究的文献报道。

发明内容

本发明的第一目的是设计了一种在线中空纤维膜液相微萃取液相色谱联用的装置，用于多糖中单糖组分的在线分析，定量分析多糖中单糖组分的色谱检测，为多糖组成、活性成分研究提供实验装置。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种中空纤维膜液相微萃取液相色谱联用的装置，该装置包括进样部件、液相色谱泵、六通阀、色谱柱、检测器、样品环、废液瓶和超声波清洗机，所述的超声波清洗机内设置中空纤维膜液相微萃取装置，所述的中空纤维膜液相微萃取装置两端分别设置液相色谱通用管路，一端液相色谱通用管路与所述的六通阀和进样部件相连接，所述的六通阀的分别与所述的液相色谱泵、色谱柱、样品环和废液瓶连接，所述的色谱柱与所述的检测器连接，所述的检测器与废液瓶连接。

作为进一步改进，所述的中空纤维膜液相微萃取装置包括萃取剂容器、第一连接管、第二连接管和中空纤维膜，所述的萃取剂容器左右两端分别设置第一通孔与所述的第一连接管连接，上端中部设置第二通孔与所述的第二连接管，所述的中空纤维膜内置于萃取剂容器内，且两端分别从萃取剂容器左右两端的第一通孔穿出，且部分突出，并用环氧胶水固定于第一通孔上，所述的第一连接管内分别与所述的液相色谱通用管路相连。

作为进一步改进，所述的中空纤维膜为长度220 cm，内径200 1000 μm，外径500 2000 μm，膜壁孔径0.10.5 μm，形状为圆柱体，材料为聚丙烯、混合纤维酯、硝酸纤维素、聚偏氟乙烯、醋酸纤维素、再生纤维素、聚酰胺、聚四氟乙烯或聚氯乙烯，所述的中空纤维膜突出萃取剂容器第一通孔的部分为0.20.6 cm。

作为进一步改进，所述的第一连接管和第二连接管为长度0.52 cm，内径500 1000 μm，外径750 2000 μm，无膜孔，形状为圆柱体，材料为聚丙烯、聚偏氟乙烯、聚醚醚酮、玻璃、硅胶、聚四氟乙烯或聚氯乙烯。

作为进一步改进，所述的环氧胶水用量10-50 mg，需室温固化24 h。