[发明专利]荧光SiO2胶体试剂的制备方法及使用荧光SiO2胶体试剂的试纸

权利要求书

1.荧光SiO₂胶体试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备氨基修饰的荧光SiO₂纳米粒子：利用聚乙二醇辛基苯基醚、环己烷、正己醇和水形成微乳体系的液体，在微乳体系中加入二氯化三联吡啶钌六水合物溶液后搅拌，继续加入正硅酸四乙酯、氨水之后，形成核壳结构，继续加入正硅酸乙酯和3-氨基丙基三乙氧基硅烷，得到氨基修饰的SiO₂纳米粒子溶液，经过破乳、清洗、干燥后得到荧光SiO₂纳米粒子；

2)SiO₂纳米氨基的羧基化：利用N,N-二甲基甲酰胺对步骤1)中得到的纳米粒子进行清洗、搅拌得到羧基化的荧光SiO₂纳米粒子；

3)通过羧基化荧光SiO₂纳米粒子与抗体蛋白的偶联，得到抗体致敏的荧光SiO₂纳米粒子。

2.如权利要求1所述的荧光SiO₂胶体试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的具体步骤如下：

1-1)利用Triton-X100、环己烷、正己醇和水在搅拌设定时间后形成微乳体系；

1-2)在步骤1-1)得到的微乳体系中加入浓度为100mg/ml的[Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O水溶液后，进行搅拌，[Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O水溶液与步骤1-1)中加入水的体积比是1:2；

1-3)在步骤1-2)得到的溶液中加入与步骤1-2)中[Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O同体积的TEOS后进行搅拌，加入氨水后，在室温条件下，搅拌，使得溶液中形成核壳结构，进行静置；

1-4)向步骤1-3)中得到的溶液中加入步骤1-3)中TEOS体积3/5的TEOS和步骤1-3)中TEOS体积3/5的triethoxysilane，在室温条件下，继续搅拌后，得到氨基修饰的SiO₂纳米粒子；

1-5)在步骤1-4)中得到的溶液中加入丙酮，进行破乳，分别用乙醇和设定pH值的PBS对破乳后的溶液清洗数次，得到纳米粒子，将得到的纳米粒子真空冷冻干燥。

3.如权利要求1所述的荧光SiO₂胶体试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)的具体步骤如下：

2-1)将步骤1)中得到的SiO₂纳米粒子，在氮气的保护下，加入质量浓度在8％-15％的琥珀酸酐N,N-二甲基甲酰胺溶液；

2-2)持续通氮气，连续搅拌反应，得到离心的羧基化SiO₂纳米粒子；

2-3)将步骤2-2)得到的离心的羧基化SiO₂纳米粒子沉淀，对其充分干燥。

4.如权利要求1所述的荧光SiO₂胶体试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的具体步骤如下：

3-1)取设定质量的EDC，用PBS溶液使之充分溶解，形成I液；

3-2)取设定质量的羧基化的荧光SiO₂纳米粒子，用PBS溶液溶解，形成II液；

3-3)取待标记抗体蛋白,溶于PBS中，形成III液；

3-4)将步骤3-2)获得的II液和步骤3-3)获得的III液混合，在磁力搅拌下逐滴加入步骤3-1)获得的部分I液；

3-5)在室温条件下，对步骤3-4)获得的溶液在避光条件下，继续逐滴加入余下的I液；

3-6)在4℃的条件下，对步骤3-5)获得的溶液搅拌；

3-7)在4℃的条件下，对步骤3-6)获得的溶液静置；

3-8)用设定浓度的PBS溶液对3-7)获得的物质清洗三次，干燥后，获得抗体致敏的荧光SiO₂胶体试剂。

5.如权利要求1所述的荧光SiO₂胶体试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1-1)中Triton-X100、环己烷、正己醇和水的体积比是17.7:75:16:2。