[发明专利]荧光SiO2胶体试剂的制备方法及使用荧光SiO2胶体试剂的试纸

说明书

技术领域

本发明涉及荧光SiO₂胶体试剂的制备方法及使用荧光SiO₂胶体试剂的试纸。

背景技术

免疫层析技术目前最常用的方法为免疫胶体金层析技术，其基本过程是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。

免疫胶体金层析技术自从上世纪70年代被提出以来，已在生物医学，特别是医学检验领域获得了飞跃式发展，目前已有各种试纸条的开发和面市。作为诊断试剂，免疫胶体金试纸条具有结构简单、使用方便、灵敏度和准确度较高等特点。这类试纸条的基本特点是依靠胶体金特殊聚集状态下的颜色对检测结果作出判断，应用的前提是被检物本身的颜色不能干扰胶体金条带的颜色，否则难以对结果作出明确判断。但在实际应用过程中所接触到的大部分待检样品为有色液体，如酿造行业中的酱油、食醋等均具有较深的颜色，大多数农产品和加工食品的提取液也不是无色透明的液体，医学检验时所用人体体液(血清、尿液等)也具有特定颜色，这些待检样本自身固有颜色会掩盖胶体金条带的颜色，严重时无法读取检测结果。因此，为了扩大该技术方法的应用领域和范围，特提出本发明，其基本特征是以免疫荧光SiO₂纳米粒子胶体代替免疫金胶体，以荧光代替纳米金粒子的自身显色，突破了传统免疫胶体金试纸无法检测有色样品的限制，扩大了应用领域并提高了检测灵敏度。

发明内容

本发明的目的是提供荧光SiO₂胶体试剂的制备方法，以及使用荧光SiO₂胶体试剂制作检测灵敏度高、能够检测有色样品的免疫层析试纸。

为了达成上述目的，本发明采用如下技术方案：

荧光SiO₂胶体试剂的制备方法

包括以下步骤：

1)制备氨基修饰的荧光SiO₂纳米粒子：利用聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-X100)、环己烷、正己醇和水形成微乳体系的液体，在微乳体系中加入二氯化三联吡啶钌六水合物([Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O)溶液后搅拌，继续加入正硅酸四乙酯(TEOS)、氨水之后，形成核壳结构，继续加入正硅酸乙酯(TEOS)和3-氨基丙基三乙氧基硅烷(triethoxysilane)，得到氨基修饰的SiO₂纳米粒子溶液，经过破乳、清洗、干燥后得到荧光SiO₂纳米粒子；

2)SiO₂纳米氨基的羧基化：利用N,N-二甲基甲酰胺对步骤1)中得到的纳米粒子进行清洗、搅拌得到羧基化的荧光SiO₂纳米粒子；

3)通过羧基化荧光SiO₂纳米粒子与抗体蛋白的偶联，得到抗体致敏的荧光SiO₂纳米粒子。

步骤1)的具体步骤如下：

1-1)利用Triton-X100、环己烷、正己醇和水在搅拌设定时间后形成微乳体系；

1-2)在步骤1-1)得到的微乳体系中加入浓度为100mg/ml的[Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O水溶液后，进行搅拌，[Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O水溶液与步骤1-1)中加入水的体积比是1:2；

1-3)在步骤1-2)得到的溶液中加入与步骤1-2)中[Ru(bpy)₃]²⁺Cl^-₂·6H₂O同体积的TEOS后进行搅拌，加入氨水后，在室温条件下，搅拌，使得溶液中形成核壳结构，进行静置；