[发明专利]一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、活化和扩大培养各菌种：

首先将云芝栓孔菌、黄孢原平革菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和产碱假单胞菌分别在固体培养基平板上进行活化，然后将活化后各个固体培养基上的单菌落分别进行液体培养基扩大培养，使菌体含量达到1.0×10⁸-1.0×10⁹个/mL；

步骤2、离心分离、干燥得到各微生物菌粉：

将步骤1扩大培养得到的各个微生物菌液经过离心分离，收集沉淀即为微生物菌体，干燥后得到各个微生物菌粉；

步骤3、制备复合微生物菌剂：

将步骤2得到的云芝栓孔菌、黄孢原平革菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和产碱假单胞菌的菌粉与纤维素酶混合制成复合微生物菌剂，以质量份数计，其中云芝栓孔菌15-30份、黄孢原平革菌10-20份、枯草芽孢杆菌10-20份、短小芽孢杆菌3-10份、产碱假单胞菌5-20份、纤维素酶1-3份。

2.根据权利要求1所述的一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述云芝栓孔菌和黄孢原平革菌的液体培养基为KH₂PO₄ 1.0g，Na₂HPO₄ 0.2g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，VB1 0.1mg，CaCl₂ 0.1mg，FeSO₄·7H₂O 0.1mg，ZnSO₄·7H₂O 0.01mg，CuSO₄·5H₂O 0.2mg，葡萄糖1.0g，酒石酸铵0.1g和蒸馏水1L混合均匀，并调节pH值为5-6；

所述枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的液体培养基为葡萄糖20g，蛋白胨15g，牛肉膏0.5g，NaCl 5g和蒸馏水1L混合均匀，并调节pH值为7.0；

所述产碱假单胞菌的液体培养基为胰蛋白胨10g，K₂HPO₄ 1.5g，MgSO₄·7H₂O 1.5g，甘油10mL和蒸馏水1L混合均匀，并调节pH值为7.2；

以上各菌种的固体培养基为在其液体培养基中加入15g琼脂粉制成，液体培养基和固体培养基均要经过121℃灭菌30min。

3.根据权利要求1所述的一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述纤维素酶活力为1-10万U/g。

4.根据权利要求1所述的一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述液体培养基扩大培养为在28-30℃培养。

5.根据权利要求1所述的一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述液体培养基扩大培养包括三角瓶一级扩大培养和发酵罐二级扩大培养。

6.根据权利要求5所述的一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述液体培养基扩大培养具体包括以下步骤，首先将各个菌种的液体培养基加入三角瓶中，然后将各个固体培养基上的单菌落分别接入相对应的三角瓶中，培养至各个三角瓶中菌体含量达到1.0×10⁸-1.0×10⁹个/mL；然后将各个菌种的液体培养基加入发酵罐中，并将三角瓶中的菌体接入相对应的发酵罐中，培养至各个发酵罐中菌体含量达到1.0×10⁸-1.0×10⁹个/mL。

7.根据权利要求1所述的一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤二的干燥温度为30-40℃。