[发明专利]一种高纯度蔗果聚糖单体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及高纯度蔗果聚糖单体的制备方法，尤其涉及利用高效液相色谱制备高纯度蔗果聚糖单体的方法。

背景技术

蔗果低聚糖，又称低聚果糖(FOS)，是指1～5个果糖基以β-2，1键连接在蔗糖的D-果糖基上而形成的蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)和蔗果六糖(GF5)的混合物，如式1所示。它是一种存在于水果、蔬菜、蜂蜜等物质中的天然活性成份，是优良的水溶性膳食纤维。低聚果糖作为益生元的代表，除具有一般功能性低聚糖的物理化学性质外，最引人注目的生理特性是它能明显改善肠道内微生物种群比例，具有润肠通便、增强免疫力、促进矿物质的吸收、改善肠道菌群、双相调节微生态平衡的“整肠”生理功能。甜度为蔗糖的0.3-0.6倍，是一种清甜可口的功能性食品配料，以其安全性和显著功能得到世界范围的公认。

由于低聚果糖具有优异的生理学功能，因此普遍地被用作保健食品配料，在我国低聚果糖亦被用做食品配料及营养强化剂。但是，高纯度蔗果聚糖单体的制备难度非常大，导致相关产品质量很难控制。中国专利CN102408457中采用硅胶柱色谱制备蔗果三糖和蔗果四糖，纯度只能达到90％，无法作为高纯度对照品使用。王涛等人采用聚丙烯酰胺凝胶柱分离得到了高纯度的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，但是洗脱速度低(0.2ml/min)、洗脱时间需要500分钟，制备效率太低，不适合工业化的生产方式。目前，尚未见到可适用于工业化生产的同时制备三种高纯度蔗果聚糖单体的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用制备高效液相色谱技术一步分离得到纯度98％以上的蔗果聚糖单体的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种蔗果聚糖单体的制备方法，包括以下步骤：

(1)将低聚果糖样品加水溶解，用滤膜过滤，得到制备样品溶液；

(2)用制备高效液相色谱法分离制备样品溶液，收集每个馏分，色谱条件：色谱柱为X Amide，流动相为乙腈和水，柱温为室温，流动相速度为8～12ml/min，进样量为每次200～300μl，检测器为示差检测器或者蒸发光散射检测器；

(3)将收集到的馏分分别减压浓缩、干燥，得到蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。

进一步地，步骤(1)所述水的用量是低聚果糖样品重量的8～12倍。

进一步地，步骤(1)所述滤膜是0.45μm微孔滤膜。

进一步地，步骤(2)所述乙腈和水的体积比是7～9﹕1～3。

进一步地，步骤(2)所述乙腈和水的体积比是75﹕25。

进一步地，步骤(2)所述X Amide色谱柱的规格为20×250mm，30×250mm或50×250mm。

进一步地，步骤(2)所述X Amide色谱柱的膜厚为10μm。

进一步地，步骤(2)所述流动相速度为10ml/min。

进一步地，该制备方法还包括：(4)用HPLC-ELSD方法测定所得蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的纯度。

进一步地，该制备方法还包括：(5)对所得蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖进行MS，¹H-NMR和¹³C-NMR的测定。

本发明的有益效果是：

1本发明只需一步就能从低聚果糖中分离得到高纯度的蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖，产物纯度均在98％以上，可作为高纯度对照品使用。

2本发明分离时间短，25min内就能完成洗脱。

3本发明的制备量较大，可以放大生产，样品浓度为80～120mg/mL，每次进样200μL，能够分离20mg左右样品。

4本发明的制备方法回收率高、样品无损失、分离环境缓和、节约溶剂、生产成本低。

附图说明

图1为实施例1中分离低聚果糖的制备高效液相色谱图。

图2为实施例2中分离低聚果糖的制备高效液相色谱图。

具体实施方式

实施例1

(1)称取200mg低聚果糖，加入2ml水溶解，用0.45μm微孔滤膜过滤，得到制备样品溶液，溶液浓度为100mg/mL；